论文摘要
TERE1（Transitional epithelial response gene1）移行上皮反应基因1，又称UBIAD1（UbiA prenyltransferase domain containing1）含UbiA异戊烯基转移酶结构域1。用FISH （Fluorescence in situ Hybridization）方法检测到TERE1（UBIAD1）定位于人体1p36微卫星标记D1S2667和D1S434之间，编码一个含338个氨基酸的蛋白质，分子量为36.8KD。该基因广泛表达于人体各组织中。TERE1（UBIAD1）可以通过与ApoE相互作用来影响脂代谢，调节胆固醇的运输和储藏。TERE1（UBIAD1）突变在人眼中引发SCCD（Schnyder Crystalline Corneal Dystrophy）疾病。生物信息学预测TERE1（UBIAD1）是一个十次跨膜蛋白，C端和N端均位于膜内，包含一个异戊烯基转移酶结构域。TERE1（UBIAD1）是人体中的MK-4合成酶，具有侧链切割和异戊烯化功能，而且TERE1（UBIAD1）参与体内脂代谢的调节，与膀胱癌的形成有关。我们推测TERE1（UBIAD1）通过与ApoE相互作用，利用组织中MK-4为底物，参与脂质代谢，调节组织中胆固醇的量，影响肿瘤发生和SCCD形成。为研究TERE1（UBIAD1）与Ras的关系。本文利用siRNA技术敲低HEK293细胞中TERE1（UBIAD1）的表达，发现Ras-MAPK信号通路的下游蛋白ERK被激活。加入SS（Sulindac Sulfide）、GW5074等抑制剂阻断Ras信号通路，检测不到磷酸化的ERK，证明TERE1（UBIAD1）与Ras蛋白或Ras通路上游蛋白有相互作用，细胞中TERE1（UBIAD1）的表达量可以调节Ras-MAPK信号通路的激活与否。结合实验室其他人FRET和IP实验结果，发现TERE1（UBIAD1）与Ras蛋白有相互作用，是Ras蛋白的负调控子。进一步研究发现在敲低TERE1（UBIAD1）表达的HEK293细胞中转染BFP-H-Ras和RBD（Ras binding domain）后，Ras在质膜上的积累量明显增多。TERE1（UBIAD1）与肿瘤细胞有什么关系呢？通过脂质体LipofectamineTM2000将外源TERE1（UBIAD1）基因导入膀胱癌细胞系T24中，细胞计数发现转染TERE1（UBIAD1）48小时后，实验组T24细胞数目锐减。MTT实验发现转染TERE1（UBIAD1）的实验组T24细胞活力明显降低，且差异显著。流式细胞术检测到转染TERE1（UBIAD1）的T24细胞周期发生改变，出现凋亡峰。FITC和PI双染实验发现转染TERE1（UBIAD1）48小时后，处于凋亡期的T24细胞占93.7%。本文通过在HEK293和T24细胞中的实验，证明TERE1（UBIAD1）和Ras存在相互作用，是Ras蛋白的负调控子，参与Ras-MAPK信号转导途径。外源导入TERE1（UBIAD1）后，T24细胞走向凋亡。本研究为Ras-MAPK信号通路做了补充。TERE1（UBIAD1）可以诱导肿瘤细胞凋亡，可以据此为抗癌药物和肿瘤研究提供参考。