沙利度胺对博来霉素致大鼠肺纤维化的干预作用及机制

论文摘要

目的：肺间质纤维化是一种顽固且死亡率极高的肺疾病。其包括一组以进行性、不可逆的由瘢痕形成引起的肺结构破坏为特征的肺部疾病，最终导致器官功能失常，气体交换障碍，而死于呼吸衰竭。特发性肺纤维化（IPF）是肺间质纤维化中最常见，致死率最高的类型，诊断后平均生存三至五年。这反映了缺乏有效的治疗方法来改变疾病的进程。IPF发病机制仍为未知，并且尚无有效的治疗措施。目前规范的包括皮质类固醇和细胞毒素剂的抗炎治疗疗效很小，因此，迫切需要一种新的治疗方法。沙利度胺具有抗炎、免疫调节和抗血管生成的作用。目前已经证实沙利度胺能够减轻大鼠中博来霉素诱导的纤维化，其明确的作用机制尚不清楚。文献报道，在实验性肺损伤动物模型中，肺损伤后纤维化的减弱伴有血管内皮生长因子（VEGF）表达的降低，提示抑制新生血管生成可能是其作用机制，同时动物模型中白介素-6（IL-6）的表达也减少，提示沙利度胺可能存在多种作用方式抑制了肺损伤后纤维化的进程。本实验旨在通过测量血清中转化生长因子-β1（TGF-β1）、血管内皮生长因子（VEGF）的含量以及肺组织Ⅰ型胶原蛋白的表达水平，研究沙利度胺、地塞米松对博来霉素致大鼠纤维化的干预作用，探讨沙利度胺可能的作用机制。方法：选取清洁级健康、SD雄性大鼠120只，由河北医科大学实验动物中心提供，体重210±10g，适应性饲养一周后，随机分为四组：（1）对照组：30只，各时间点10只，一次性向气管内注入0.1ml/100g生理盐水，于假造模后第1日用生理盐水灌胃（1ml/100g），1次/d，分别于7天、14天、28天各处死10只；（2）模型组：30只，各时间点10只，一次性向气管内注入博来霉素A5（5mg/kg），于造模后第1日用生理盐水灌胃（1ml/100g），1次/d，分别于7天、14天、28天各处死8只、10只、8只；（3）沙利度胺组：30只，各时间点10只，一次性向气管内注入博来霉素A5（5mg/kg），于造模后第1日以沙利度胺与生理盐水配成终浓度为1%溶液，100mg/kg灌胃，1次/d，分别于7天、14天、28天处死10只大鼠；（4）地塞米松组：30只，各时间点10只，一次性向气管内注入博来霉素A5（5mg/kg），在造模成功后第1日腹腔注射地塞米松（0.3mg/100g），1次/d，分别于7天、14天、28天各处死10只。各组大鼠均小心剪断其双侧股动脉，放血处死，并收集血液，利用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测离心血清中TGF-β1、VEGF的浓度。取下大鼠右肺下叶，于4%多聚甲醛溶液中固定，用免疫组织化学法检测Ⅰ型胶原的表达，测量并记录每个视野阳性染色的平均积分光密度（IOD）值。通过Masson胶原染色和HE染色，间接评价肺纤维化及肺泡炎的严重程度，并采用Szapiel法分为4个等级。采用SPSS13.0统计学软件处理所得实验数据。结果：1分析肺组织病理结果：模型组：各相同时间点肺泡炎和纤维化严重程度明显高于对照组（P<0.01），说明动物纤维化模型复制成功。沙利度胺组：肺泡炎和纤维化严重程度均较模型组减轻：7d、14d、28d时，肺泡炎程度较模型组明显减轻（P<0.01）；各相同时间点纤维化程度较模型组减轻（P<0.05）。地塞米松组：肺泡炎和纤维化严重程度均较模型组减轻：各相同时间点，地塞米松组肺泡炎严重程度较模型组明显降低（P<0.05）；纤维化程度较模型组7d时明显减轻（P<0.01），14d、28d时均明显减轻（P<0.05）；各相同时间点，地塞米松与沙利度胺组的肺泡炎和纤维化程度均无统计学意义（P＞0.05）。2肺组织Ⅰ型胶原蛋白的表达：（平均分光密度表示）：模型组大鼠肺组织Ⅰ型胶原蛋白含量随造模时间延长逐渐升高，28天达高峰，7天、14天、28天与对照组、沙利度胺组、地塞米松组相比差异有统计学意义（P<0.01）；沙利度胺组、地塞米松组大鼠Ⅰ型胶原蛋白含量呈低水平升高趋势，造模后各时间点Ⅰ型胶原蛋白含量均明显低于模型组（P<0.01）；但沙利度胺组、地塞米松组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。3血清中TGF-β1、VEGF含量变化：模型组大鼠血清中TGF-β1的含量均明显高于对照组、沙利度胺组和地塞米松组，差异有统计学意义（P<0.01）。沙利度胺组和地塞米松组各相同时间点血清中TGF-β1的含量差异无统计学意义。模型组大鼠血清中VEGF的含量逐渐升高，至28天达高峰，各时间点其含量均明显高于沙利度胺组和地塞米松组，7天、14天、28天与对照组、沙利度胺组、地塞米松组相比差异均有统计学意义（P<0.01）；沙利度胺组和地塞米松组各相同时间点血清中VEGF含量差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：1沙利度胺、地塞米松在博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的模型中，能够减少肺间质的胶原沉积，对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化具有一定的治疗作用。2沙利度胺在博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型中具有与地塞米松相似的抗纤维化作用，其机制可能是通过抑制细胞因子TGF-β1、VEGF的表达，从而减轻早期的炎症反应和血管形成，最终抑制肺纤维化进程。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 沙利度胺与肺纤维化
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历