湖北省鸡致病性大肠杆菌分离调查及毒力因子PCR检测方法的建立

论文摘要

鸡大肠杆菌病是严重危害养鸡业的重要疾病,由于其血清型复杂,耐药菌株不断增加,给防治工作带来了巨大困难。近几年,湖北地区鸡大肠杆菌发生较为普遍。因此,很有必要对湖北地区鸡大肠杆菌的血清型、耐药性及致病性大肠杆菌携带的毒力因子进行细致的调查和分析,找出发病规律,制定出较为科学合理的预防和治疗措施。本文从湖北部分地区鸡场的发病鸡中共分离出39株大肠杆菌,经常规方法培养、纯化、镜检,生理生化鉴定,符合大肠杆菌培养特性、形态特征及生化特性。经O因子血清鉴定,主要为O1、O2、O78三种血清型,优势血清型为O1（15.3%）和O78（38.5%）,占定型菌株的87.5%,占试验菌株的53.8%。采用Kirby-Bauer纸片法,用19种药敏片对19株鸡源性大肠杆菌分离株进行药敏实验,结果表明其耐药性非常强。具有耐药性的菌株占全部菌株的100%,且所有菌株都有多重耐药性,最少的也对7种药物耐药（1株）,最多的对18种药物耐药（2株）。对复方新诺明、磺胺异恶唑、头孢拉定、阿莫西林/棒酸、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、新霉素8种药物耐药的最为普遍（11株）,占全部耐药菌株的57.8%。高敏药物仅有丁胺卡那霉素和壮观霉素,氯霉素和庆大霉素仅可作为中敏药物,对本地区的鸡大肠杆菌病防治选药具有一定指导作用。对39株鸡大肠杆菌分离株进行了FimH、kpsⅡ、papC、tsh、iss、iucD、irp2、vat、cavC、hlyE、astA等11种毒力相关因子进行了基因扩增实验。结果显示它们的扩增频率按大小分别为分别为iss（71.79%）、iucD（66.67%）、irp2（66.67%）、cavC（58.97%）、vat（28.21%）、tsh（25.64%）、astA（23.08）、kpsⅡ（17.95%）、FimH（12.82%）、papC（15.4%）、hlyE（2.56%）。iss、iucD、irp2、cavC四种毒力因子出现的频率较高,这与大肠杆菌的R质粒在此地区不同菌株间的转移较快有很大的关系。它们作为毒力标志基因,能为本地区鸡大肠杆菌病的诊断、免疫防制等提供理论依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 禽大肠杆菌病概述
• 1.2 病原学特征
• 1.2.1 形态及染色特征
• 1.2.2 抵抗力
• 1.2.3 分布
• 1.2.4 培养特性
• 1.2.5 生化特性
• 1.2.6 抗原与血清型
• 1.3 致病机理研究
• 1.4 流行病学
• 1.4.1 历史与现状
• 1.4.2 易感动物与发病日龄
• 1.4.3 发病季节与发病状况
• 1.4.4 传染源与传播途径
• 1.4.5 与其他疾病的关系
• 1.5 临床症状与病理变化
• 1.5.1 胚胎与幼雏早期死亡
• 1.5.2 气囊炎
• 1.5.3 急性败血症
• 1.5.4 卵泡炎
• 1.5.5 肉芽肿
• 1.5.6 心包炎
• 1.5.7 输卵管炎
• 1.5.8 滑膜炎
• 1.5.9 肠炎
• 1.5.10 全眼球炎
• 1.5.11 脑炎型
• 1.5.12 肿头综合症
• 1.6 诊断
• 1.6.1 临床诊断
• 1.6.2 病原学诊断
• 1.7 防治状况
• 1.7.1 优化环境
• 1.7.2 加强消毒工作
• 1.7.3 加强种鸡管理
• 1.7.4 提高禽体免疫力和抗病力
• 1.7.5 药物防治
• 2 菌株分离与病原血清型鉴定
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 材料来源
• 2.1.2 培养基和试剂
• 2.1.3 分离培养与镜检
• 2.1.4 生化试验
• 2.1.5 大肠杆菌O抗原因子血清凝集试验
• 2.2 试验结果
• 2.2.1 细菌分离结果
• 2.2.2 培养特性与形态特征
• 2.2.3 生理生化试验
• 2.2.4 血清型鉴定
• 2.3 讨论
• 3 鸡大肠杆菌的药敏试验
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 药敏试纸
• 3.1.2 培养基
• 3.1.3 供试菌株
• 3.1.4 试验方法
• 3.2 结果
• 3.2.1 19株大肠杆菌对19种抗菌药物的药敏试验
• 3.2.2 鸡源性大肠杆菌分离株多重耐药发生情况
• 3.2.3 细菌来源、血清型和耐药性之间的关系
• 3.3 讨论
• 4 鸡大肠杆菌部分毒力相关基因的克隆
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 主要试剂和仪器
• 4.1.2 试验菌株
• 4.1.3 PCR检测大肠杆菌毒力基因
• 4.1.3.1 引物
• 4.1.3.2 模板的制备
• 4.1.3.3 PCR扩增反应体系
• 4.1.3.4 PCR扩增反应程序
• 4.1.3.5 PCR产物鉴定
• 4.2 试验结果
• 4.2.1 PCR扩增结果
• 4.2.2 靶基因的扩增频率
• 4.3 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢