论文摘要
本试验以异育银鲫（Allogynogenetic crucian）为实验对象,首先进行了土霉素对异育银鲫的急性毒性试验,并在此基础上,设计了6组不同土霉素剂量的饲料（0、100、250、625、1563、3907 mg/kg）并进行喂养试验,通过测定对生长、生理生化、指标的研究,探讨其对异育银鲫的生理和毒理学影响。同时,通过测定土霉素在异育银鲫组织中的残留消除规律,为水产品的食用安全性提供科学依据。1.以体重为45.7±5g的异育银鲫为试验材料,26℃条件下,测定腹腔注射土霉素的24h,48h,96h的死亡率。结果表明腹腔注射后的24h,48h,96h LD50分别为1.90g/kg、1.30g/kg、1.20g/kg,初步表明土霉素对异育银鲫为低毒。2.通过对6组异育银鲫投喂添加不同剂量土霉素的饲料,于试验的第2、4、6、8周末取样测定土霉素对异育银鲫的生长、鱼体营养成分及肝胰脏和肠道内消化酶的活性的影响。结果表明:除剂量为100mg/kg剂量组鱼体粗蛋白较对照组有显著的影响（P＜0.05）和250 mg/kg剂量组中粗脂肪较对照组有显著影响,其他剂量组中鱼体成分均较对照组无显著变化,且剂量高于625 mg/kg时对异育银鲫的生长呈轻微抑制作用。试验前期（0～4周）,土霉素对消化酶活性均呈促进作用;试验后期（4～8周）,高于250 mg/kg剂量组肠道蛋白酶活性在剂量时呈抑制作用,肝胰脏脂肪酶活性和淀粉酶也都随剂量增加而逐渐减小,肠道内脂肪酶和淀粉酶活性则变化不明显。3.通过对6组异育银鲫投喂添加不同剂量土霉素的饲料,于试验的第2、4、6、8周末取样,测定土霉素对异育银鲫肝胰脏中的SOD、CAT、GSH-Px的活性,MDA的含量及Na+/K+-ATP酶活性的影响。结果表明,在喂养试验初期,各剂量组SOD、CAT、GSH-PX的活性均被诱导,MDA含量变化不明显;试验后期,剂量高于250mg/kg,SOD活性逐渐降低;CAT活性随着剂量的增加先升后降,但仍然高于对照组;GSH-Px活性呈上升趋势,并在剂量组1563mg/kg和3907mg/kg处升高明显;肝胰脏中MDA含量较对照组有显著的增加。Na+/K+-ATP酶活性则不断降低。上述结果表明,当土霉素剂量低于250 mg/kg时,异育银鲫体内的抗氧化系统会诱导抗氧化酶活性的增加清除体内的氧自由基;高于此剂量会导致体内的抗氧化系统失衡,肝胰脏和鳃组织受损。4.通过对6组异育银鲫（Allogynogenetic crucian）投喂添加不同剂量土霉素的饲料（0、100、250、625、1563、3907 mg/kg）,饲养两个月后,测定了土霉素对异育银鲫血清生理生化指标的影响,同时采用聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法,对不同剂量组异育银鲫的肝胰脏和肾脏内EST同工酶和SOD同工酶进行了电泳分析,以了解土霉素对异育银鲫的毒性机理。结果表明:小于250 mg/kg剂量的土霉素对血清生化指标都没有显著影响,大于250 mg/kg剂量的土霉素能引起谷草转氨酶活性的降低,总蛋白和白蛋白含量减少,而甘油三酯、葡萄糖、总胆固醇、尿素氮、肌酐和血清钾离子含量都较对照组明显升高,肝胰脏和肾脏的两种同工酶活性都较对照组明显减小,肝功能和肾脏机能明显发生障碍。5.通过对6组异育银鲫（Allogynogenetic crucian）投喂添加不同剂量土霉素的饲料（0、100、250、625、1563、3907 mg/kg）,饲养两个月后,测定了土霉素对异育银鲫脾脏指数,头肾指数,血清抗菌活力和溶菌酶活力,以评价土霉素对异育银鲫非特异性免疫功能的影响。结果表明:土霉素对异育银鲫的异育银鲫的免疫器官指数和抗菌活力的变化都没有明显的影响,仅最高剂量组溶菌酶活力有明显的下降。土霉素对异育银鲫免疫器官发育没有明显的影响,仅对非特异性免疫功能有轻微的影响。6.利用高效液相色谱法研究土霉素在异育银鲫肝胰脏、肌肉中的残留与消除规律,利用高效液相色谱法研究土霉素在异育银鲫肝胰脏、肌肉中的残留与消除规律,确定了合适的色谱条件:流动相为乙腈/0.01mol/L磷酸二氢钠水溶液（体积比77:23）,pH 2.5,355nm检测波长下检测。土霉素的线性范围为0.1μg/mL—15μg/mL,在肝胰脏和肌肉中的回收率在80.54%-92.94%之间。在24—26℃的水温条件下测定土霉素在鲫鱼体内的残留结果表明:在肝胰脏中,OTC的浓度在12h后达到最大值6.24mg/kg,48h后就降到较低的水平0.26mg/kg,96h后低于0.1mg/kg,在肌肉中在96h后0.15 mg/kg。