PPARγ和RXRα的表达上调增强了配体对白血病细胞生长的抑制作用

论文摘要

目的:本研究采用人急性早幼粒细胞白血病细胞（HL-60）为靶细胞,观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）的配体土槿乙酸（PLAB）联合维甲类X受体α（RXRα）的配体9-顺式维甲酸（9-cisRA）对HL-60细胞增殖、细胞周期和凋亡影响以及对PPARγ、RXRα、细胞周期蛋白CyclinD1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4表达的调节作用,探讨PLAB联合9-cisRA抑制肿瘤的作用机制。方法1 MTT比色法检测PLAB、9-cisRA及两者联合的抗癌活性。2倒置光显微镜、透射电子显微镜观察细胞形态结构改变;Hoechst33342/PI双荧光染色,荧光显微镜观察凋亡细胞核染色质凝集及区分坏死细胞。3流式细胞术分析PLAB、9-cisRA及两者联合对细胞周期的影响和诱导凋亡率的变化。4琼脂糖凝胶电泳分析凋亡细胞DNA片段。5 RT-PCR法检测PLAB、9-cisRA及两者联合对PPARγ、RXRα、CyclinD1、CDK4 mRNA表达的影响。结果1生长抑制作用PLAB、9-cisRA及两者联合均可抑制HL-60细胞生长,10μmol/L浓度的9-cisRA联合0.1μmol/LPLAB作用96 h最大抑制率达54.57 %,生长抑制作用呈时间-剂量依赖性。2细胞形态学改变10μmol/L浓度的9-cisRA联合0.1μmol/L PLAB组细胞出现明显的形态学变化。HL-60为半悬浮生长型细胞,PLAB联合9-cisRA作用后,细胞折光性降低,胞浆内颗粒增多。随着作用时间的延长,部分细胞脱壁呈悬浮状态,体积减小随后细胞皱缩,裂解似爆炸开的“菜花状”;荧光显微镜下可见,PLAB联合9-cisRA组细胞染色质浓缩呈亮珠状并形成凋亡小体等典型的凋亡形态学改变;电镜下可见凋亡细胞中,细胞器变性,染色质边集,沿核膜内缘呈团块状分布。3凋亡率0.1μmol/L PLAB联合10μmol/L的9-cisRA诱导HL-60细胞凋亡呈现时间依赖性,药物作用后72 h开始出现典型亚二倍体凋亡峰,于96 h最明显,此时细胞凋亡率达54.7 %,高于两种药物相同剂量单独用药时的凋亡率。4琼脂糖凝胶电泳结果0.1μmol/L PLAB联合10μmol/L的9-cisRA处理HL-60细胞72、96、120 h,从中提取的DNA电泳,72 h开始出现明显的梯状带,随着作用时间的延长,梯状带条带增多,条带亮度也增加。5 0.1μmol/L PLAB联合10μmol/L的9-cisRA对RXRα、PPARγ、CyclinD1、CDK4 mRNA表达的影响与对照组比较,96 h联合用药组及单独使用PLAB、9-cis-RA组RXRα、PPARγ受体表达增加,CyclinD1、CDK4表达均出现下降,而联合用药组RXRα、PPARγ受体表达较单独用药组明显升高,CyclinD1、CDK4表达明显下降,说明PLAB联合9-cisRA的作用机制与RXRα、PPARγ表达增加和CyclinD1、CDK4表达下降有关。结论1 PLAB联合9-cisRA可明显抑制HL-60细胞的生长,抑制作用呈现时间-剂量依赖性。2 PPARγ的活化在体外对HL-60细胞生长均呈负向调节作用。RXRα的激活可协同增强PPARγ配体的抗增殖作用。3 PPARγ、RXRα活化可能通过下调CDK4、CyclinD1表达,从而诱导HL-60细胞周期阻滞,抑制细胞增长,通过核受体途径调节细胞周期蛋白及蛋白激酶的表达诱导肿瘤细胞凋亡。提示PPARγ可能是白血病治疗的一个新分子靶点。

论文目录

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• 英文缩写
• 研究论文 PPARγ和RXRα的表达上调增强了配体对白血病细胞生长的抑制作用
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）在肿瘤组织中的表达及其研究进展
• 致谢
• 个人简历