论文摘要
目的构建表达小鼠B7-1基因的重组逆转录病毒载体并在真核细胞中检测其蛋白表达，为进一步利用B7-1基因进行免疫基因治疗作准备。方法提取小鼠总RNA，并用紫外分光光度计进行测定总RNA的OD260以及OD260／OD280，RT-PCR法获得B7-1基因，对产物用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切，经凝胶纯化后与同样经过酶切和纯化的病毒载体在T4连接酶的作用下进行连接，16℃连接过夜，产物进行电泳，切下所需条带纯化，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，培养，挑取单克隆菌落进行筛选，然后再用双酶切加以鉴定，进行DNA序列测定。用转染包装细胞系得到的病毒感染小鼠胰腺癌细胞，用Western方法鉴定瞬时表达。结果酶切、PCR及测序鉴定证实，小鼠B7-1基因全长编码区被准确插入至酶切位点HindⅠ和BamHⅠ之间，并且未发现有碱基突变或移位。在真核细胞中检测到蛋白表达。结论成功构建并鉴定了含小鼠B7-1基因的重组逆转录病毒载体，为今后研究奠定了坚实的物质基础。
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