重型再生障碍性贫血患者效应T细胞损伤骨髓造血细胞调控因素的研究

论文摘要

目的研究肿瘤坏死因子一β （TNF-β）对重型再生障碍性贫血（SAA）患者效应T细胞（CD8+HLA-DR+T细胞）损伤骨髓造血的影响,探讨TNF-β在SAA免疫发病中的作用及CD8+HLA-DR+T细胞在SAA免疫发病中的地位。方法第一部分以免疫磁珠阳性分选15例SAA患者骨髓CD8+HLA-DR+T细胞作为效应细胞,以阴性分选去除15名正常人骨髓单个核细胞中CD3+T细胞后作为靶细胞,两者混合培养,于体系中分别加入不同浓度TNF-β（终浓度分别为15ng/ml、25ng/ml.50ng/ml）为实验组,并设空白对照组,孵育72h后,通过流式细胞术以AnnexinV检测靶细胞凋亡状况,采用ELISA法测定培养上清液IL-10、IFN—γ水平。第二部分以免疫磁珠（MACS）分选15例SAA患者骨髓CD8+HLA-DR+T细胞,分为三组：白介素-2（IL-2）组（终浓度分别为0U/L、0.1U/L.1U/L.10U/L.100U/L.1000U/L）:CsA组（在IL-2浓度基础上每孔均加入终浓度为400ng/ml的CsA）;受体拮抗剂组（在IL-2浓度基础上每孔均加入终浓度为8ug/mlIL-2受体拮抗剂）,孵育72h后MTT法检测细胞增殖率。Ficoil法分离SAA患者骨髓单个核细胞,分为CsA组、IL-2组、对照组（不加任何刺激因素）,孵育18h后加入佛波酯（PMA）等活化4h,流式细胞仪检测（?）CD8+HLA-DR+T细胞胞内TNF-β蛋白表达水平。结果第一部分1.空白对照组及3个实验组细胞凋亡比例分别为（49.85±20.33）％.（51.65±20.34）％.（55.94±20.19）％.（57.72±19.45）％,TNF-β终浓度50ng/ml组及25ng/ml组均明显高于空白组和15ng/ml组细胞凋亡比例（P<0.05）,但空白组与15ng/ml组、50ng/ml与25ng/ml组细胞凋亡比例差异无统计学意义（P>0.05）。2.空白对照组及各实验组培养上清IL-10浓度分别为(217.99±29.47ng/ml.（216.47±29.00）ng/ml.（212.15±13.19）ng/ml.（218.01±28.61） ng/ml,各组差异无统计学意义（P>0.05）。3.TNF-p终浓度50ng/ml组培养上清IFN-γ水平[（593.50±48.18）ng/ml]明显高于空白对照组[（544.85±69.77）ng/ml],15ng/ml组[（567.38±74.51）ng/ml]、25ng/ml组[（544.05±79.69） ng/ml]（P<0.05）。第二部分1、IL-2浓度为10U/L、100U/L、1000U/L的MTT检测OD值分别为0.357±0.117、0.405±0.122、0.461±0.136明显高于对照孔（0.232±0.111）,亦高于CsA组和受体拮抗剂组（P<0.05）,而CsA组和受体拮抗剂组无显著差异（P>0.05）。2、IL-2组CD8+HLA-DR+T细胞胞内TNF-β蛋白表达（60.77±26.37）%明显高于对照组（41.41±24.63）%,同时CsA组（23.99±20.16）%明显低于空白组（P<O.05）。结论1、TNF-β能增强SAA患者效应T细胞凋亡骨髓造血细胞并呈浓度依赖性,高水平的TNF-β可能还促进SAA患者CD8+HLA-DR+T细胞分泌IFN-γ,两者具有协同细胞毒作用。2、IL-2不仅显著刺激SAA患者CD8+HLA-DR+T细胞体外增殖,还可促进该群细胞分泌高水平的TNF-β,而CsA和IL-2受体拮抗剂不仅能抑制此增殖作用,同时CsA亦能显著抑制CD8+HLA-DR+T细胞分泌TNF-β。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、肿瘤坏死因子-β对重型再生障碍性贫血患者效应T细胞损伤骨髓造血的影响
• 1. 对象和方法
• 1.1 研究对象
• 1.2 主要试剂与仪器
• 1.3 实验方法
• 2 结果
• 2.1 流式细胞仪检测分选细胞
• 2.2 Annexin V＆PI检测靶细胞凋亡率
• 2.3 ELISA法检测培养体系上清中IL-10、IFN-γ水平
• 3 讨论
• 4 小结
• +HLA-DR⁺T细胞增殖和TNF-β分泌的研究'>二、重型再生障碍性贫血患者CD8⁺HLA-DR⁺T细胞增殖和TNF-β分泌的研究
• 1. 对象和方法
• 1.1 研究对象
• 1.2 主要试剂与仪器
• 1.3 实验方法
• 2 结果
• 2.1 流式细胞仪检测分选细胞
• 2.2 细胞增殖测定
• 2.3 TNF-β蛋白表达水平
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢