吗啉硝唑注射液在肝功能减退受试者的药代动力学研究

论文摘要

吗啉硝唑为5-硝基咪唑类同系化合物,其对临床分离厌氧革兰阴性无芽孢杆菌和革兰阳性球菌均具有较强抗菌作用；对产气荚膜杆菌、脆弱拟杆菌、韦荣氏球菌的抗菌活性较甲硝唑、替硝唑强2-8倍,与奥硝唑相当；对吉氏拟杆菌、卵圆形拟杆菌、普通类杆菌和产黑类杆菌的抗菌活性优于甲硝唑、替硝唑2～4倍,与奥硝唑相当。吗啉硝唑体内抗厌氧菌活性强于甲硝唑、替硝唑、奥硝唑。小鼠静脉给药的体内保护作用优于口服给药。吗啉硝唑在大鼠体内的消除主要通过肝代谢、少部分排泄。吗啉硝唑注射液Ⅰ期临床试验安全剂量范围为2.5～24 mg/kg,在10～24 mg/kg剂量范围内在人体消除呈线性动力学特征。吗啉硝唑在健康志愿者中的消除相半衰期（t1/2β）为（5.70～6.65）h,多次给药后的Cav为（11.22±0.90）μg·mL-1, AUCss为（89.77±7.17）μg·h-mL-1。动物试验和Ⅰ期临床试验结果显示吗啉硝唑主要通过肝脏代谢消除。人体给药后18.9%～41.1%的给药量以原型物从尿中排泄,代谢物M2的排泄比例为给药量1.0%～3.6%。肝功能减退可改变主要经肝代谢药物的体内过程,从而影响药物的安全性和疗效。本课题研究吗啉硝唑注射液在肝功能中度减退受试者中的药代动力学特征,并与健康受试者作同期配对比较,为制定吗啉硝唑注射液在肝功能减退受试者感染时的给药方案提供参考。本研究内容包括以下两部分：第一部分吗啉硝唑及其代谢物血浆、尿液浓度检测方法的建立及验证第二部分肝功能减退受试者和健康受试者单剂静脉滴注吗啉硝唑注射液500mg后的药代动力学研究第一部分吗啉硝唑及其代谢物血浆、尿液浓度检测方法的建立及验证为进行吗啉硝唑注射液在中度肝功能减退受试者的药代动力学研究,本部分建立了简便、快速、高灵敏度的LC-MS/MS法用于测定血浆和尿液中吗啉硝唑及其代谢物M2的浓度。采用Waters Alliance 2690高效液相色谱仪串联Finnigan TSQ Quantum Discovery Max型三重四级杆质谱仪,固定相为Shiseido MGII CAPCELL PAK色谱柱（50 mm×2.0mm, 3μm）,流动相为5mM甲酸铵：含0.1%甲酸的乙腈（97：3）梯度洗脱,流速：0.3mL/min,内标为奥硝唑。血浆和尿液样本均采用直接蛋白沉淀法预处理后,5μL进样分析。吗啉硝唑及M2在血浆和尿溶液标准曲线浓度均为0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5和1.0μg/mL,质量控制样本浓度均为0.01、0.03、0.4和0.8μg/mL,最低定量浓度（LLQC）为0.01μg/mL。吗啉硝唑原药血浆和尿液溶液提取回收率分别为101.0%和100.3%,代谢产物M2血浆和尿液提取回收率分别为105.6%和112.6%。吗啉硝唑血浆溶液和尿溶液质控样本批内RSD分别为≤7.0%和≤7.9%,回收率分别为90.0%～103.0%和(96.8～105.0%；批间测定结果RSD分别为≤7.1%和≤4.7%,回收率分别为91.7%～99.9%和95.5%～108.3%；周间测定结果RSD分别为≤10.0%和≤6.7%,回收率分别为95.0%～103.3%和96.8%～103.3%。吗啉硝唑代谢产物M2血浆溶液和尿溶液质控样本批内重现性结果RSD分别为≤8.9%和≤7.8%,回收率分别为（100.0～106.3）%和（90.2～102.2）%；批间测定结果RSD分别为≤8.1%和≤5.2%,回收率分别为97.8%～105.0%和91.7%～106.7%；周间测定结果RSD分别为≤6.4%和≤11.9%,回收率分别为96.9%～113.3%和92.3%～103.3%。吗啉硝唑、代谢产物M2和内标储备液—80℃放置3个月稳定；吗啉硝唑和代谢产物M2血浆及尿溶液高、中、低及LLQC浓度质控样本室温放置6h稳定；上述质控样本预处理后放置48h稳定；血浆及尿溶液高、中、低及LLQC浓度质控样本—80℃冻融3次稳定；上述质控样本—80℃长期放置至6个月稳定。吗啉硝唑血浆样本2或10倍稀释后回收率为111.4%～118.6%,尿液样本10或100倍稀释后回收率为94.5%～100.8%；M2血浆样本的回收率为112.1%～117.4%,尿液样本的回收率为100.7%～101.1%。考察空白血浆或尿液基质（来自于6个不同个体）对待测物及内标质谱信号的影响,吗啉硝唑和内标血浆中基质效应分别为（106.2±8.9）%和（110.0±8.6）%,吗啉硝唑和内标尿液中基质效应分别为（89.1±5.8）%和（60.1±4.0）%；吗啉硝唑代谢产物M2血浆及尿液中基质效应分别为（107.7±6.5）%和（91.5±7.4）%。本测定方法及验证结果符合SFDA药品审评中心有关药代动力学研究原则中生物样品的分析要求。第二部分肝功能减退受试者和健康受试者单剂静脉滴注吗啉硝唑注射液500mg的药代动力学研究根据研究方案,12例筛选合格的中度肝功能减退受试者（男性7人,女性5人）进入本研究。根据受试患者的年龄、性别、体重特征1：1平行匹配相应的健康受试者作为平行对照。吗啉硝唑500 mg单次静脉滴注45min后在48h内留取受试者不同时间点的血浆、尿液样本,同时观察记录不良事件,必要时予以相应处理。以HPLC-MS/MS法测定所采集的血浆、尿液样本的药物原型及代谢物M2浓度；采用Phoenix WinNonlin 6.0软件（Pharsight公司,美国）估算非房室药动学参数和房室模型参数。采用方差分析对参数值作显著性统计检验。结果表明,中度肝功能减退对吗啉硝唑原药和代谢物的药动学均产生影响。肝功能减退受试者静滴吗啉硝唑后在8-48h时间段内的血药浓度明显高于健康受试者,同时,代谢物M2在给药中和给药结束后4h内的血药浓度也明显高于健康受试者。肝功能减退受试者体内的吗啉硝唑原药及代谢物血药浓度变异性高于健康受试者,且个体差异明显。吗啉硝唑在中度肝功能减退者（A组）中的体内过程与健康受试者（B组）者明显不同。A组平均AUC0-48h、AUC0-∞明显高于B组,分别为B组的1.59倍和1.68倍,A组的T1/2（9.50h）较B组的T1/2（5.83h）延长了63%,同样前者MRT（12.11h）也较后者MRT（7.18h）延长了69%。A组和B组在血浆中药物清除率（CLt）分别为4.75 L/h和7.23 L/h,A组较B组减缓了34%。上述PK参数包括AUC0-48h、AUC0-∞, T1/2、MRT和CLt在两组间的差异均具有统计学意义（P<0.05）。房室模型分析结果显示吗啉硝唑原型在肝功能减退者的消除半衰期与健康受试者相比延长50%（P<0.01）,提示肝功能减退主要改变吗啉硝唑的代谢从而减缓其排泄。代谢物M2血浆药动学参数的变化与原药不同,同时代谢比率明显降低（0.86% vs 1.25%,P<0.05）。吗啉硝唑原型及代谢物在中度肝功能减退者中的48h平均累积尿排出率分别为19.4%和1.6%,肝功能减退组和健康受试者组间差异无显著差异。与健康受试者相比,肝功能减退者对吗啉硝唑的排泄速率和肾清除率均显著降低（P<0.05）,降低幅度分别为30%和42%,代谢物的尿排泄参数在两组受试者中的差异无统计学意义。两组受试者给予吗啉硝唑后未出现严重不良事件、重要不良事件以及试验提前中止。中度肝功能减退组发生6例10例次发生药物相关不良反应（ADR）,其中临床ADR 2例3例次,分别为胃肠道反应1例2例次和皮疹1例；实验室异常ADR包括肝功能异常（ALT、AST等升高）2例4例次、血小板降低1例和尿蛋白阳性2例。健康受试者组发生实验室异常（总胆红素、结合胆红素升高）1例2例次,为ADR,两组间ADR发生率有显著差异（P<0.05）。结论：中度肝功能减退者接受单剂吗啉硝唑注射液500mg后与健康受试者相比,药物在体内有一定蓄积,表现为吗啉硝唑原药及部分代谢物（M2）自体内清除减缓（CLt、CLr降低）,消除半衰期延长,致该药在目前设定剂量（500mg）下体内达一定程度积蓄,药物体内暴露量增加,中度肝功能减退者的AUCo-∞较健康受试者增加了68%。因此建议应用该药时可调整给药方案,适当减量应用,剂量的调整幅度尚需参考该药的主要代谢产物（M6、M7）的体内过程而定（本次试验所测定的代谢物M2并非主要代谢产物）。

论文目录

研究创新点

中文摘要

英文摘要

缩略语及简写

前言

参考文献

第一部分吗啉硝唑及其代谢物血浆、尿液浓度检测方法的建立及验证

一、材料与方法

1. 仪器设备

2. 药品与试剂

2.1 对照品及内标物

2.2 试剂

3. LC-MS/MS分析条件

3.1 色谱条件

3.2 质谱条件

4. 标准曲线及质量控制样本的配制

4.1 标准曲线配制

4.2 质量控制样本的配制

5. 血浆及尿液样本前处理方法

6. 药物浓度计算方法

7. 血浆浓度和尿浓度测定方法学验证

二、结果

1. 特异性

2. 标准曲线及最低定量限

3. 提取回收率

4. 进样间重复性

5. 精确度

6. 样本稳定性及系统稳定性

6.1 贮备液稳定性

6.2 预处理前放置稳定性

6.3 样本预处理后放置稳定性

6.4 样本冻融稳定性

6.5 样本长期放置稳定性

7. 稀释度试验

8. 基质效应

三、讨论

四、小结

五、参考文献

第二部分肝功能减退受试者和健康受试者静脉滴注吗啉硝唑注射液500mg后的药代动力学研究

一、材料和方法

1. 受试者

2. 受试者选择

2.1 中度肝功能减退受试者入选标准和排除标准

2.1.1 入选标准

2.1.2 排除标准

2.2 匹配的健康受试者的入选标准和排除标准

2.2.1 选标准

2.2.2 排除标准

2.3 合并用药

2.4 受试者饮食控制

3. 研究药物（受试药物）及给药剂量与方法

3.1 研究药物（受试药物）

3.2 给药剂量与方法

4. 血、尿样品留取及处理

4.1 血样采集

4.2 尿样采集

5. 安全性观察

6. 血浆及尿液药浓度测定

7. 药代动力学参数计算及统计分析

7.1 药动学数据的整理与描述性统计

7.2 药动学非房室模型和房室模型分析

7.2.1 非房室模型分析

7.2.2 房室模型分析

7.3 药动学参数的统计检验

7.3.1 统计检验

7.3.2 方差分析

二、结果

1. 受试者一般资料

2. 受试者基线情况

2.1 中度肝功能减退组

2.2. 健康受试者组

3. 药代动力学（PK）结果

3.1 平均血药浓度

3.2 个均血药浓度

4. 尿药浓度及尿排出率

4.1 平均尿药排泄量与尿排出率

4.2 个体尿药浓度、排泄量与排泄率

5. 非房室药动学参数及统计分析结果

5.1 血浆药动学参数

5.2 尿排泄药动学参数

6. 药动学房室模型分析结果

6.1 房室模型分析的总体结果

6.2 房室模型个体参数与拟合效果图

6.3 房室模型参数的性别差异

7. 安全性评价

7.1 临床不良事件

7.2 实验室检查不良事件

7.3 合并用药情况