玉米胚芽油增强免疫力及辅助降血脂功能的实验研究

论文摘要

目的进一步探讨玉米胚芽油增强免疫力、辅助降低血脂的功能性作用及其安全性,为新型玉米胚芽油的开发及带动其在药品、食品、保健品等相关行业的发展提供可靠的理论依据。方法1毒理学实验（1）小鼠急性毒性实验体重18～22g的小鼠20只,雌雄各半,按20ml/kg·bw灌胃2次,染毒总剂量为20.Og/kg·bw,连续观察14d,记录小鼠的中毒表现及死亡情况。（2）遗传毒性实验①沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）实验菌株为经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨基酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102,体外活化系统为多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆制备的S-9混合液。根据毒性测定的结果,设立8、40、200、1000、5000μg/皿5个剂量,同时设立溶剂对照组、阳性对照组和自发回变组。实验按照平板掺入法在加S-9与不加S-9混合液的条件下进行,每个组别设3个平皿。若受试物的回变菌落数为自发回变菌落数的2倍以上,并具有剂量—反应关系则判定为阳性。②小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验体重25～30g的小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组：正常对照组（花生油）、阳性对照组（环磷酰胺,40mg/kg·bw）、3个实验组的染毒剂量分别为2.5、5.0、10.0g/kg·bw。各组灌胃量均为15ml/kg·bw,灌胃共2次,间隔24h。末次给予受试物6h后处死小鼠,常规制片。每只小鼠镜检1000个嗜多染红细胞（PCE）,记录微核细胞数,计算微核率（即微核细胞数/嗜多染红细胞,以千分率表示）。同时观察200个PCE,计算观察到的正染红细胞（NCE）数目,并计算PCE/NCE比值。③小鼠精子畸形实验体重27-31g的雄性小鼠25只,分组及操作方法同②,每天灌胃1次,连续5d。第35d处死小鼠,常规制片。每只小鼠计数1000个结构完整的精子,并记录畸变类型和数量,计算精子畸形率（以百分率表示）。（3）大鼠30d喂养实验体重70-90g的断乳大鼠80只,雌雄各半,随机分为花生油正常对照组及玉米胚芽油高、中、低剂量组（20、10、5ml/kg·bw）,各组灌胃量均为20ml/kg·bw,每天灌胃1次,连续30d。第30d尾静脉取血,测血常规；之后禁食16h,腹动脉取血,进行血生化测定。同时对脏器进行病理检查。2增强免疫力实验将192只雌性KM小鼠随机分为4个免疫组,每个免疫组的48只小鼠再均分为正常对照组、玉米胚芽油低、中、高剂量组,正常对照组给予花生油,各实验组分别给予1.67、3.33、10.00ml/kg·bw的玉米胚芽油,连续灌胃30d,测定各项免疫指标。3辅助降血脂实验3.1动物实验将60只健康成年雄性SD种大鼠,根据血脂水平随机分为正常对照组、高脂模型组、阳性对照组、玉米胚芽油低、中、高剂量组（1.67、3.33、10.00ml/kg·bw组）,正常对照组给予正常饲料；高脂模型组给予高脂饲料和花生油；阳性对照组给予高脂饲料喂养的同时灌胃0.05g/kg·bw的非诺贝特溶液；其他3个实验组在给予高脂饲料喂养的同时灌胃不同剂量的玉米胚芽油,35d后观察大鼠血脂水平变化。3.2人群实验（1）人体试食实验将符合单纯高血脂等要求的108名自愿参加并签署知情同意书的志愿者确定为实验对象,随机分为实验组（56人）和对照组（52人）,实验组采用玉米胚芽油代替午餐、晚餐烹调用油（每餐10m1）；对照组不进行任何干预,所有受试者在实验期间均保持正常的饮食和生活习惯。45d后对所有实验对象进行体检,并检测各项观察指标。（2）问卷调查膳食调查采用24h回顾法,询问并记录近3d的膳食摄入情况；饮食及生活习惯调查,采用自行设计的调查问卷,由经过统一培训的调查员进行现场调查,了解实验者的基本信息、饮食行为和生活方式等。结果1毒理学实验（1）急性毒性实验14d内动物无中毒表现,且无死亡。该受试物对两种性别小鼠的MTD均大于20.0g/kg·bw。根据急性毒性分级标准,该样品属无毒级物质。（2）遗传毒性实验①Ames试验两次实验中受试物各剂量组回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2倍,亦无剂量—反应关系,说明在加与不加S-9时该样品对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株实验菌株均未呈现遗传毒性。②小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验与正常对照组比较,各实验组微核率无统计学差异（P>0.05）；阳性对照组有统计学差异（P<0.01）。说明该样品对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核无致突变作用。③小鼠精子畸形实验与正常对照组比较,各实验组小鼠精子畸形率无统计学差异（P>0.05）；阳性对照组有统计学差异（P<0.01）。说明该样品对小鼠精子无致畸作用。（3）大鼠30d喂养实验各实验组大鼠的胃、肠、肝、肾、脾和卵巢/睾丸组织未见明显异常。组织学检查,对照组和高剂量组有少数组织标本出现病理学改变,但程度较轻且无组间分布差异,考虑与动物质量有关,不能说明实验组出现有意义的病理学改变。2增强免疫力实验与正常对照组比较,玉米胚芽油低、高剂量组小鼠的足跖肿胀度均高于正常对照组（P<0.05,P<0.01）；低、中、高剂量组小鼠抗体生成细胞数、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均高于正常对照组（P<0.01）；高剂量组的小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力高于正常对照组（P<0.01）；中、高剂量组小鼠的NK细胞活性均高于正常对照组（P<0.01,P<0.05）。3辅助降血脂实验3.1动物实验实验过程中,各组动物生长、活动正常,与正常对照组比较,各组动物的体重差异没有统计学意义（P）O.05)。与高脂模型组比较,阳性对照组和低、中、高剂量组大鼠TC、TG水平均低于高脂模型组（P<0.01）; HDL-C水平均高于高脂模型组（P<0.01）。与高脂模型组比较,阳性对照组、低、中、高剂量组的血清TC下降百分率分别为18.77%、10.77%、16.92%、17.54%,血清TG下降百分率分别为27.54%、9.84%、14.10%、22.62%,血清HDL-C上升值分别为0.66、0.28、0.34、0.38 mmol/L。3.2人群实验（1）人体试食实验实验期间受试者的精神状态、饮食、睡眠、大小便情况等均未见异常。试验前后血常规、血生化指标和肝、肾功能各项检测指标均在正常值范围内。自身及与对照组比较,实验组实验后血清TC降低百分率分别为14.41%、14.407%,差异均有统计学意义（P<0.01）；TG降低百分率分别为26.50%、37.61%,差异均有统计学意义（P<0.01）。实验组血清TC、TG有效率分别为69.64%、58.93%,总有效率为64.29%,明显高于正常对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。HDL-C上升值由高到低依次是实验组、正常对照组,分别为0.07mmol/L、0.05 mmol/L,但是组间差异没有统计学意义（P>0.05）。（2）问卷调查①一般情况：文化程度比例最高的为本科（31%）；职业以专业技术人员比例最大（53%）；家庭月收入多集中在2500-5000元。实验组与对照组比较,文化程度分布、职业分布、家庭月收入、每月饮食开支及体重指数的差异没有统计学意义（P>0.05）；BMI的最小值为16.73,最大值为36.73,均值为25.50±36.22；偏瘦的占2%,超重的占43%,肥胖的占12%。②生活习惯：81.9%的人认为自己的生活比较规律；76.0%的人的平均睡眠时间在5-8小时之间；81.9%的人认为自己的睡眠有规律；54.5%的人几乎不服用保健品。③膳食营养状况：每天都吃早饭的比例为71.6%；每天能定量进餐的人群为76.2%；82.9%的人没有挑食偏食的习惯；50.4%的人有暴饮暴食的习惯。与膳食宝塔比较,油、盐的人均摄入量分别为32.71g、8.02g,均高于推荐的摄入量；蔬菜类、水果类、鱼虾类、奶及奶产品的人均摄入量分别为243.83g、107g、25.95g、36.11g,均低于推荐的摄入量；喝酒的人群占71.23%；饮茶的人群占50.93%；喝咖啡、软饮料的比例较小。能量人均摄入量为2037.66kcal;碳水化合物、脂肪、蛋白质的供热比分别为60.84%、23.69%、16.37；与RNI/AI相比,营养素Mg、Zn、Ca、Se、Cr、VA、VB1、VB2、VE等的摄入水平偏低；营养素Fe的摄入水平稍高,为19.5 mg/d；④膳食营养与生活习惯对TG影响：两餐间隔时间越短、经常吃零食、BMI值越大、经常暴饮暴食的人群,TG水平比较高。结论1毒理实验结果显示,各指标均在正常范围内,表明该玉米胚芽油是安全的。2玉米胚芽油能提高小鼠的足跖肿胀度、NK细胞活性、抗体生成细胞数、单核-巨噬细胞碳廓清能力,增强小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬能力；根据《保健食品检验与评价技术规范》判定标准,玉米胚芽油具有增强免疫力的作用。3不同剂量的玉米胚芽油,均能降低大鼠的TC、TG水平和升高大鼠的HDL-C水平。玉米胚芽油能降低高血脂人群的TC、TG水平、能升高HDL-C水平,根据《保健食品检验与评价技术规范》判定标准,玉米胚芽油有辅助降血脂功能。4问卷调查结果显示,高血脂人群的BMI指数普遍偏高,饮酒较普遍；油、盐的人均摄入量均高于推荐的摄入量；蔬菜类、水果类、鱼虾类、奶及奶产品的人均摄入量均低于推荐的摄入量。营养素Mg、Zn、Ca、Se、Cr、VA、VB1、VB2、VE等的摄入水平偏低,营养素Fe的水平稍高。两餐间隔时间越短、经常吃零食、BMI值越大、经常暴饮暴食的人群,TG水平比较高。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 符号说明
• 前言
• 第一部分 毒理学实验
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 第二部分 增强免疫力实验
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 第三部分 辅助降血脂实验
• 1. 材料与方法
• 1.1 动物实验
• 1.2 人群实验
• 2. 结果
• 2.1 动物实验
• 2.2 人群实验
• 3. 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文
• 学位论文评阅及答辩情况表