论文摘要
目的:研究转染maspin cDNA在胃癌细胞中的表达及其对uPA和uPAR表达的影响。探讨maspin基因抑制胃癌浸润转移的机制。方法:克隆maspin基因全长,质粒PCR2.1用HindⅢ/XbaI双酶切后靠T4连接酶与maspin基因连接,将该重建的maspin/PCR2.1表达载体转染进胃癌细胞株MKN28和SGC7901中,并用RT-PCR和western bolt检测maspin基因,uPA和uPAR表达的变化。结果:1、成功构建maspin/PCR2.1重组质粒。转染质粒DNA被整合到SGC7901和MKN28细胞中,稳定筛选建株成功。2、maspin、uPA和uPAR在mRNA水平的表达,MKN28细胞稳定转染空质粒和maspin/PCR2.1表达质粒后maspin的光密度值分别是0.3996±0.0807和1.4623±0.2168,差异有显著性（P<0.05）,SGC7901细胞稳定转染空质粒和maspin/PCR2.1表达质粒后maspin的光密度值分别是0.3007±0.0716和1.4566±0.3219,差异有显著性（P<0.05）。SGC7901细胞稳定转染空质粒和maspin/PCR2.1表达质粒后uPA的光密度值分别是0.6864±0.1658和0.3754±0.1847,差异有显著性（P<0.05）,MKN28细胞稳定转染空质粒和maspin/PCR2.1表达质粒后uPA的光密度值分别是0.6133±0.1542和0.3609±0.1713,差异有显著性（P<0.05）。SGC7901细胞稳定转染空质粒和maspin/PCR2.1表达质粒后uPAR的光密度值分别是0.6252±0.1064和0.3172±0.1736,差异有显著性（P<0.05）,MKN28细胞稳定转染空质粒和maspin/PCR2.1表达质粒后uPAR的光密度值分别是0.5797±0.1172和0.2982±0.1409,差异有显著性（P<0.05）。转染后maspin mRNA的表达均上调,uPA和uPAR mRNA的表达均下调。3、maspin、uPA和uPAR在蛋白水平的表达,SGC7901细胞稳定转染空质粒和maspin/PCR2.1表达质粒后maspin的光密度值分别是0.2117±0.0135和0.8726±0.1648,差异有显著性（P<0.05）。MKN28细胞稳定转染空质粒和maspin/PCR2.1表达质粒后maspin的光密度值分别是0.2901±0.0911和0.8812±0.1572,差异有显著性（P<0.05）。SGC7901细胞稳定转染空质粒和maspin/PCR2.1表达质粒后uPA的光密度值分别是0.6861±0.2310和0.2677±0.0826,差异有显著性（P<0.05）, uPAR的光密度值分别是0.6247±0.1407和0.2048±0.0714,差异有显著性（P<0.05）。MKN28细胞稳定转染空质粒和maspin/PCR2.1表达质粒后uPA的光密度值分别是0.6197±0.1425和0.2641±0.0823,差异有显著性（P<0.05）,uPAR的光密度值分别是0.5674±0.1256和0.2013±0.0703,差异有显著性（P<0.05）转染后maspin蛋白的表达均上调,uPA和uPAR蛋白的表达均下调。结论:转染maspin cDNA能降低胃癌细胞株MKN28和SGC7901中uPA和uPAR的表达,有效抑制其侵袭及转移潜能。
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标签：表达载体论文; 尿激酶型纤溶酶原激活物论文;