远志皂苷对Aβ1-40诱导的AD大鼠大脑神经细胞凋亡及tau蛋白过度磷酸化影响的实验研究

论文摘要

阿尔茨海默病（Alzheimer disease, AD）是一种大脑原发性神经退行性病变,其主要病理特征包括老年斑、神经元的变性或丢失以及神经纤维缠结。随着全球人口老龄化的到来,阿尔茨海默病的发病率日益增加,给家庭和社会带来越来越沉重的负担,使得AD已成为当今神经科学和老年医学备受关注的研究课题,探讨AD发病的分子机制,开发治疗AD的药物迫在眉睫。目的：1.研究远志皂苷对Aβ1-40诱导的大鼠脑神经毒性作用和神经细胞损伤作用的保护作用。2.研究远志皂苷对Aβ1-40诱导的AD大鼠脑神经细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达的影响。3.探讨远志皂苷对Aβ1-40诱导的AD大鼠脑神经元tau蛋白过度磷酸化的影响。方法：1.通过脑立体定位仪在大鼠右侧海马CA1区注射Aβ1-40建立AD大鼠模型,并连续灌胃远志皂苷25天。利用HE染色和尼氏体染色方法观察远志皂苷对Aβ1-40引起的大鼠脑神经元的毒性作用以及细胞损伤作用的保护作用。2.应用免疫组织化学的方法观察远志皂苷对AD大鼠脑神经细胞凋亡蛋白Bcl-2, Bax, Caspase-9和Caspase-3蛋白表达的影响。3.应用免疫组织化学方法,间接免疫荧光标记技术检测远志皂苷对AD大鼠脑神经元tau蛋白、PKA、PP-2A表达的影响。结果：1.大鼠海马CA1区内注射Aβ1-4025天之后,与假手术组比较,模型组中神经元数量显著减少；细胞核固缩深染,呈不规则形；胞体退化,胞质减少；核仁不明显。而药物组动物给药25天后,神经元形态数量与模型组相比,神经元的数量显著增多,形态也比较完整,提示远志皂苷治疗组中神经元损伤程度有所好转。2.免疫组织化学结果显示,与假手术组相比,模型组与远志皂苷高中低各剂量治疗组中Bcl-2蛋白的表达量显著提高；而与模型组比较,远志皂苷高中剂量治疗组中的Bcl-2蛋白的表达量也有显著性提高。说明神经细胞可能通过过量表达Bcl-2蛋白来抵触Aβ1-40引起的细胞凋亡,保护自身在损伤后避免死亡。而模型组中Bax蛋白的表达量较远志皂苷高中低各剂量治疗组和假手术组显著增加,致使Bax/Bcl-2比值显著上升,说明Bax/Bcl-2的比值才是决定细胞存亡的关键。另一方面,与假手术组相比,远志皂苷高中低剂量治疗组和模型组中Caspase-9与Caspase-3蛋白的表达量明显增加,提示细胞凋亡细胞内信号途径在AD发生过程的作用。3.与假手术组相比,模型组和远志皂苷高中低各剂量治疗组中总tau蛋白的表达量明显增加。模型组中PKA的表达量较假手术组和远志皂苷高中低剂量治疗组明显增加,且差异显著。而与模型组比较,假手术组和远志皂苷高中低剂量治疗组中PP-2A的表达量明显增加。说明PKA和PP-2A确实参与了tau蛋白的过度磷酸化过程,提示远志皂苷可能通过上调PP-2A、下调PKA的表达,来维持tau蛋白的去磷酸化和磷酸化动态平衡。结论：1.Aβ在脑内的沉积会造成神经毒性和神经细胞损伤,本研究发现远志皂苷对Aβ沉积造成的神经毒性有显著的抑制作用,对由Aβ引起的神经元损伤有定的神经保护作用。2.神经细胞凋亡是AD发生中的一个重要机制。本研究发现远志皂苷对Aβ1-40诱导的拟AD样大鼠脑神经细胞凋亡有抑制作用,其脑保护作用可能通过影响细胞凋亡调控基因Bcl-2家族、Caspase家族表达有关。3.NFT是AD患者脑内典型的病理特征之一,其产生的主要原因是tau蛋白的异常过度磷酸化。本研究发现远志皂苷可能通过上调PP-2A、下调PKA的表达,来维持tau蛋白的去磷酸化和磷酸化动态平衡,对NFT的形成有抑制作用。

论文目录

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• 符号说明
• 前言
• 1-40诱导的AD大鼠脑神经细胞病理形态变化及远志皂苷改善作用的实验研究'>第一部分 Aβ_1-40诱导的AD大鼠脑神经细胞病理形态变化及远志皂苷改善作用的实验研究
• 一、材料
• 1.1 动物
• 1.2 试剂和药品
• 1.3 仪器
• 二、方法
• 1-40的体外孵育'>2.1 Aβ_1-40的体外孵育
• 2.2 试剂配制
• 2.3 动物模型制作
• 2.4 药物干预
• 2.5 病理学检测
• 2.6 统计分析
• 三、结果与分析
• 1-40诱导的AD大鼠脑神经细胞形态的影响'>3.1 远志皂苷对Aβ_1-40诱导的AD大鼠脑神经细胞形态的影响
• 1-40诱导的AD大鼠脑神经元损伤作用的影响'>3.2 远志皂苷对Aβ_1-40诱导的AD大鼠脑神经元损伤作用的影响
• 四、讨论
• 第二部分 远志皂苷对AD大鼠神经细胞相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3表达影响的实验研究
• 一、材料
• 1.1 动物
• 1.2 试剂和药品
• 1.3 主要仪器
• 二、方法
• 1-40的体外孵育'>2.1 Aβ_1-40的体外孵育
• 2.2 主要试剂的配制
• 2.3 动物模型制作
• 2.4 药物干预
• 2.5 病理学检测
• 2.6 统计分析
• 三、结果与分析
• 3.1 远志皂苷对AD大鼠脑神经细胞中Bcl-2蛋白表达的影响
• 3.2 远志皂苷对AD大鼠脑神经细胞中Bax蛋白表达的影响
• 3.3 远志皂苷对AD大鼠脑神经细胞中Caspase-9蛋白表达的影响
• 3.4 远志皂苷对AD大鼠脑神经细胞中Caspase-3蛋白表达的影响
• 四、讨论
• 第三部分 远志皂苷对AD大鼠脑神经细胞tau蛋白过度磷酸化影响的实验研究
• 一、材料
• 1.1 动物
• 1.2 试剂和药品
• 1.3 主要仪器
• 二、方法
• 1-40的体外孵育'>2.1 Aβ_1-40的体外孵育
• 2.2 主要试剂的配制
• 2.3 动物模型制作
• 2.4 药物干预
• 2.5 病理学检测
• 三、结果与分析
• 3.1 远志皂苷对AD大鼠脑神经细胞中tau蛋白表达的影响
• 3.2 远志皂苷对AD大鼠脑神经细胞中PKA表达的影响
• 3.3 远志皂苷对AD大鼠脑神经细胞中PP-2A表达的影响
• 四、讨论
• 总结
• 参考文献
• 附图
• 发表的学术论文
• 个人简历
• 致谢
• 综述