论文摘要
目的:探讨可溶性重组脂联素球状结构域融合蛋白（GST-gAD）在大肠杆菌中的表达及其抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的生物学活性。方法:①用CaCl2法制备感受态细菌JM109,质粒pGEX-KG-gAD转化大肠杆菌JM109,空载质粒pGEX-KG作为内对照同时转化JM109,筛选建株;②以正交设计软件正交设计助手Ⅱ选择L9（34）正交设计表在三个水平,四个因素（IPTG浓度,诱导时间,诱导温度,细菌密度OD600）下确定优化表达的最佳组合条件;③亲和层析法纯化GST-gAD;④用MTT法检测融合蛋白GST-gAD对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响。结果:①重组质粒pGEX-KG-gAD成功转化大肠杆菌JM109;②对GST-gAD诱导表达影响最大的因素为温度,最佳诱导表达组合条件为温度32℃,IPTG的浓度1.0 mmol/L,诱导前细菌的生长密度OD600 1.0,诱导表达时间1.5h,此条件下其表达量占菌体总蛋白的6 %左右;③获得纯化的分子量为42KD的GST-gAD;④GST-gAD浓度高于0.5μmol/L时对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖具有明显的抑制作用结论:①通过正交设计确定了可溶性GST-gAD融合蛋白在大肠杆菌中表达的优化条件;②GST-gAD融合蛋白在原核表达系统中可以有效表达,并且具有较好的生物学活性。
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