肉鸡组织的热应激损伤与Hsp90水平及其mRNA表达的变化

论文摘要

将100只1日龄的AA肉鸡随机分成五组,每组20羽。在正常的环境温度下对受试鸡进行30天的适应性饲养后,除对照组外,将其余80只受试鸡的环境温度迅速由（25±1）℃上升至（37±1）℃,并分别持续进行2、3、5和10 h的热应激处理。对试验到期的对照组和应激组肉鸡进行剖杀,选取具有代表性的心脏、肝脏和肾脏三个组织,研究肉鸡热应激组织损伤与Hsp90及其mRNA表达的相关性。利用组织病理、免疫组织化学、酶联免疫吸附试验和实时荧光定量RT-PCR方法检测热应激状态下受试肉鸡各组织的病理性损伤、Hsp90的定位、Hsp90和hsp90 mRNA的定量表达。组织病理和免疫组织化学结果显示,在热应激开始的2-5 h期间,受试鸡心脏、肝脏、肾脏、肺脏、脾脏及法氏囊组织的细胞损伤表现出随着热应激时间的持续而逐渐加重的趋势,病理变化特征以颗粒变性、脂肪变性、充血和坏死为主。Hsp90阳性颗粒在各组织细胞的胞浆和胞核中均有分布,尤其是以胞核内分布较为明显。并且在组织细胞相对完整的部位Hsp90阳性信号明显强于其他部位。另外,在受试鸡心肌间质的小动脉管壁和血管内皮细胞、肝细胞窦状隙及中央静脉内皮细胞、肾小球毛细血管上皮细胞、肾小管间质小动脉管壁和血管内皮细胞、肺动脉管壁及其血管内皮细胞、脾脏中央动脉管壁及其内皮细胞均可见Hsp90的强阳性表达。ELISA和FQ RT-PCR检测结果显示,与对照组相比,热应激2 h后,Hsp90在肉鸡心脏、肝脏、肾脏组织中的表达量呈极显著增加（p＜0.01）,而在应激持续到3-5 h时呈现下降趋势但差异不显著,待热应激持续至10 h后,心脏（p＜0.01）和肾脏（p＜0.05）组织中的Hsp90含量又逐渐回升,肝脏组织中的Hsp90含量则仍然下降,但差异不显著（p＞0.05）。热应激过程中肉鸡的心脏、肝脏及肾脏中hsp90 mRNA的含量的变化与心脏和肾脏中Hsp90的表达变化比较一致。即:热应激初期hsp90 mRNA的水平和Hsp90的含量有所上升,到应激3 h和5 h时,又呈现一致下降,随着应激时间的延长,到应激10 h时,hsp90 mRNA的水平与Hsp90的表达又开始出现回升趋势。由以上结果可以得出结论:热应激状态下肉鸡组织细胞的应激性病理损伤与Hsp90的分布和含量存在一定程度的关联,在Hsp90阳性信号比较强的区域组织细胞相对比较完整,我们可以推断Hsp90能够发挥细胞保护作用。在所有被检组织的血管内皮细胞和小动脉管壁均可见Hsp90的强阳性表达,提示这些组织中的血管功能活动与Hsp90密切相关,血管内皮细胞和小动脉管壁中Hsp90含量的改变可能会通过这些血管的收缩和舒张而影响生命重要器官的血液供应状况。Hsp90含量随热应激时间延长而出现的波动性变化,与同期各组织细胞hsp90 mRNA的含量变化相一致,说明Hsp90的表达与其mRNA量的变化都依赖于热应激的时间和温度,提示Hsp90和hsp90mRNA的含量变化可作为判定组织应激损伤的标志。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 第一篇 文献综述
• 1 应激概述
• 2 热应激概述
• 3 热休克蛋白概述
• 3.1 Hsps的分类和命名
• 3.2 Hsps的主要分子生物学特性
• 3.3 Hsps的主要分子生物学功能
• 3.4 Hsps的检测方法
• 4 Hsp90概述
• 4.1 Hsp90的基因和蛋白质结构
• 4.2 Hsp90的表达调控机制
• 4.3 Hsp90在类固醇激素中发挥效应的作用
• 4.4 Hsp90的组织分布变化
• 4.5 热应激时Hsp90表达量的变化
• 4.6 Hsp90的研究展望
• 参考文献
• 第二篇 试验研究
• 第一章 肉鸡急性热应激损伤及Hsp90定位表达
• 1 材料和方法
• 1.1 试验动物及试验设计
• 1.2 试剂
• 1.3 试验方法
• 2 结果
• 2.1 热应激受试鸡各受检组织的病理变化
• 2.2 Hsp90在受试鸡各受检组织中的分布
• 3 讨论
• 第二章 热应激肉鸡组织中Hsp90及其hsp90 mRNA的定量表达
• 1 材料和方法
• 1.1 试验动物及试验设计
• 1.2 主要试剂和仪器
• 1.3 肉鸡各种组织细胞中Hsp90的定量检测
• 1.4 肉鸡各种组织细胞中hsp90 mRNA的定量检测
• 1.5 统计分析
• 2 结果
• 2.1 Hsp90在试验鸡各组织器官中的定量表达
• 2.2 hsp90 mRNA在试验鸡各组织器官中的定量表达
• 3 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附录-主要试剂配制
• 致谢