Adam28在小鼠成骨细胞样细胞系MC3T3-E1中的表达研究

论文摘要

牙齿萌出,牙槽骨改建都是牙齿发育中的正常生理现象,其中萌出通道的形成及牙槽骨改建都是发育过程中的重要环节,在这些过程中成骨细胞发挥重要作用,它通过释放细胞因子及自身感受内外环境等刺激因素,与破骨细胞相互调节,从而使牙槽骨改建过程中的骨吸收和骨形成达到一种动态平衡,以保证牙齿发育过程处于正常状态。ADAM28是ADAM家族最近发现的一种跨膜分泌型糖蛋白,它同样具有ADAM家族的生理功能:参与细胞增殖,分化,胞外基质分泌﹑裂解基质蛋白和细胞迁移等。研究显示,ADAM28基因参与了牙胚的发育过程,并在牙源性间充质细胞的增殖﹑分化和凋亡中发挥重要的调控作用。同时ADAM28基因具有金属蛋白酶活性,因而它对于细胞外基质的形成和很多分子的外功能区处理有重要的调节作用。本课题的研究目的是从蛋白和mRNA水平探讨adam28对小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1的生物学特性的影响,并从中分析它可能的作用机制,为今后对ADAM28功能的深入研究提供可靠的实验和理论依据。本课题的主要研究内容和结果如下:实验一:采用细胞培养,免疫组织化学和免疫荧光染色方法检测ADAM28在成骨细胞的染色情况。结果证实:adam28在体外培养小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1上有表达;提示其可能参与了成骨细胞的生物学功能。实验二:采用细胞培养,RT-PCR方法在mRNA水平上进一步检测adam28mRNA在小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1的表达情况。结果证实:adam28mRNA表达于小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1;提示成骨细胞样细胞MC3T3-E1可能自身分泌adam28。实验三:通过自制的细胞体外加载装置,对小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1依次施加50KPa,100KPa,150KPa的持续静压力1h后,分别培养24h和48h;观察细胞在形态学上的相应变化,并通过免疫组织化学染色方法检测受力作用后adam28蛋白的表达情况。结果显示:细胞受力后, adam28免疫组化染色强度随压力值的增大而明显降低;加压后细胞培养24h和48h无明显差异;提示不同大小的静压力可以影响成骨细胞样细胞MC3T3-E1上adam28蛋白表达强度,并对成骨细胞的一些生物学活动起到一定作用。实验四:通过自制的细胞体外加载装置,对小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1依次施加50KPa,100KPa,150KPa的持续静压力1h,分别培养24h和48h;使用RT-PCR的方法在mRNA水平上检测受力作用后adam28mRNA的表达情况。结果显示:细胞受力后,其adam28在mRNA水平上的表达随压力值增大而明显降低,提示在应力状态下,小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1的生物学功能发生一定的改变,进而影响了合成adam28的过程。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验一 adam28 蛋白在小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1 中表达研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 实验二 adam28m RNA在小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1 中表达研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 实验三 adam28蛋白在持续静压力下小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-E1中表达研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 实验四 adam28m RNA在持续静压力下小鼠成骨细胞样细胞MC3T3-El中表达研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附图
• 个人简历和研究成果
• 致谢