论文题目: 海绵细胞在微载体表面贴附特征与规律的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 化学工程
作者: 赵权宇
导师: 邓麦村,张卫
关键词: 海绵,细胞培养,微载体,细胞粘附
文献来源: 中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）
发表年度: 2005
论文摘要: 海绵是一种重要的海洋药源生物。为解决海绵药源“供给不足”问题,海绵细胞离体培养的研究受到了关注。本文研究海绵细胞在微载体表面的贴附特性及相关科学问题,为药源生产技术提供基础。 论文考察了海绵细胞在商用微载体上的贴附,其中繁茂膜海绵细胞在玻璃微载体上贴附最好。对各种材料相关性能测试说明,材料-细胞亲和力、材料表面电荷及表面润湿性能对海绵细胞贴附均有影响。 经光镜和电镜观察分析,在微载体上可贴附的是原细胞和上皮细胞。采用BrdU法鉴定各种样品的DNA复制能力,确认贴附细胞中存在原细胞,而未贴附细胞悬浮样品中基本不存在原细胞。 研究表明,繁茂膜海绵细胞在微载体上贴附的适宜温度为18℃,适宜pH为8.2;海绵细胞的贴附过程表现为细胞浓度一级响应,其吸附平衡与细胞样品中可贴附细胞浓度及细胞与载体的相对比例密切相关。 在海绵细胞与微载体的体系中,海绵细胞的贴附与聚集共存。研究发现,细胞在微载体上的贴附远快于聚集;随着体系维持培养时间的增加,细胞聚集体的颗粒直径增大,同时空载体的数量迅速增加,最终形成的则是以大细胞团或大的细胞微载体团为主的体系。 进行了微载体培养的初探。24孔板中培养3天后的细胞活性测定(MTT法)表明,微载体培养系统的细胞活性高于细胞团的培养。两种体系的摇瓶培养,也表现为微载体培养较好。
论文目录:
第一章 引言
1.1 海洋药物与海绵天然产物
1.2 海绵简介
1.3 海绵化学成分药物研究“供给不足”问题及其解决途径
1.3.1 捕捞
1.3.2 化学合成与修饰
1.3.3 水产养殖
1.3.4 反应器培养
1.3.5 共生微生物发酵
1.3.6 转基因
1.3.7 海绵细胞离体培养
1.4 海绵细胞离体培养中的几个关键问题
1.4.1 细胞离散方法
1.4.2 细胞的分离富集和鉴定
1.4.3 污染控制
1.4.4 营养需要
1.4.5 信号转导、细胞分化与凋亡
1.4.6 代谢调控
1.5 微载体动物细胞培养
1.5.1 微载体的材料
1.5.2 细胞在微载体上贴壁的影响因素
1.5.3 微载体与细胞聚集体培养
1.6 海绵细胞的粘附特性
1.6.1 细胞-细胞粘附
1.6.2 细胞-基质粘附
1.6.3 细胞粘附受体
1.7 研究思路
参考文献
第二章 海绵细胞贴附材料的选择
2.1 实验材料与方法
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验方法
2.2 结果与讨论
2.2.1 海绵块在固体材料表面的贴附
2.2.2 海绵细胞在微载体表面的贴附
2.2.3 微载体表面性质的研究
2.3 小结
参考文献
第三章 微载体上贴附的海绵细胞种类和特征的鉴别
3.1 实验材料与方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验方法
3.2 结果与讨论
3.2.1 不同细胞样品在微载体上的贴附率
3.2.2 微载体上贴附细胞种类的鉴别
3.2.3 贴附细胞的BrdU 和MTT 活性
3.2.4 贴附细胞的MTT 活性测定
3.3 小结
参考文献
第四章 海绵细胞微载体上贴附的特征和规律
4.1 实验材料与方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验方法
4.2 结果与讨论
4.2.1 pH 对贴附率的影响
4.2.2 血清与牛血清白蛋白对贴附的影响
4.2.3 温度对海绵细胞贴附率的影响
4.2.4 海绵细胞在玻璃微载体上的贴附动力学
4.2.5 细胞接种密度对贴附率的影响
4.2.6 微载体贴附过程聚集现象的考察
4.3 小结
参考文献
第五章 海绵细胞微载体培养的初步研究
5.1 实验材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 海绵细胞的多孔微载体培养
5.1.3 微载体接种密度的影响
5.1.4 细胞接种密度的影响
5.1.5 玻璃珠粒径的影响
5.1.6 Ca~(2+)/Mg~(2+) 的影响
5.1.7 繁茂膜海绵细胞的锥形瓶静态培养
5.2 结果与讨论
5.2.1 影响细胞聚集体贴附的因素
5.2.2 微载体接种密度的影响
5.2.3 细胞接种密度的影响
5.2.4 玻璃珠粒径的影响
5.2.5 Ca~(2+)和Mg~(2+) 浓度的影响
5.2.6 海绵细胞微载体锥形瓶静止培养
5.3 小结
参考文献
第六章 海绵元素与氨基酸成分分析以及基础培养基的研究
6.1 实验材料与方法
6.1.1 海绵的采集与保存
6.1.2 海绵含水比率测定
6.1.3 几种有机元素氮、碳、氢的测定
6.1.4 无机元素测定
6.1.5 总氨基酸分析
6.1.6 海水分析
6.1.7 培养基中关键因素的选择和基础培养基的优化
6.1.8 培养基的验证
6.1.9 海绵细胞抑制分化的研究
6.1.10 溶氧的测定
6.2 结果与讨论
6.2.1 海绵元素分析
6.2.2 氨基酸分析
6.2.3 培养基的优化
6.3 小结
参考文献
结论
作者简介与发表文章
致谢
发布时间: 2005-10-15
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