九孔鲍（Haliotis diversicolor Supertexta）铁蛋白基因的克隆、表达及其受活性衍生物的调控

论文摘要

铁蛋白是一切生物体内主要的铁贮存蛋白质,在一些生理和病理过程中具有重要的作用。本文成功地克隆了九孔鲍铁蛋白全长cDNA序列。其结果如下：（1）cDNA序列全长879bp,含有一个516bp的阅读框,编码171个氨基酸。该蛋白具有铁蛋白的特征性结构。氨基酸序列与无脊椎动物皱纹盘鲍同源性高达97.07%、与合浦母贝、加州海兔、长牡蛎分别为81.3%、80.7%和78.9%；（2）半定量和定量RT-PCR表明铁蛋白在健康鲍组织（消化腺,外套膜,鳃,足肌）均有表达,且消化腺中的表达量明显高于其它组织。LPS刺激后铁蛋白基因的表达量随着时间的延长而呈现逐渐的明显增加,当刺激24h时表达量增加达到最高峰,存在明显的时间依赖性,这些结果表明鲍铁蛋白参与了LPS刺激后的免疫反应；（3）通过构建重组表达质粒pET-FER,采用大肠杆菌BL21对铁蛋白进行了诱导表达,并进行了蛋白纯化和制备了多克隆抗体,结果表明：铁蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达,制备的兔多克隆抗体的效价为1：14000；（4）鉴于铁蛋白的调控受铁、氧化应激、生物信使分子、细胞因子、激素等的影响,为了探讨在无脊椎动物呼吸爆发过程中铁蛋白受ROS和RNS的调节作用,本文培养了鲍的血淋巴细胞,经LPS刺激诱导呼吸爆发产生大量的ROS和RNS,结果表明：刺激后过氧化氢和一氧化氮呈现明显的增加,且H202在铁蛋白的调节中起主导作用,并能抑制铁蛋白的表达,而NO阳离子能抵抗过氧化氢介导的铁蛋白的降低。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 文献综述
• 第一章 铁蛋白的研究进展
• 1. 铁蛋白的结构
• 2. 铁蛋白的功能与调节
• 2.1 铁对铁蛋白的调节
• 2.2 生物信使分子对铁蛋白调节
• 2.3 氧化应激调节铁蛋白
• 2.4 细胞因子调节铁蛋白的表达
• 2.5 激素调节铁蛋白的表达
• 3. 水生动物铁蛋白研究现状
• 第二部分 研究内容
• 第二章 研究内容与技术路线
• 1. 研究内容
• 2. 技术路线
• 第三章 九孔鲍铁蛋白全长cDNA的克隆与序列分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2. 结果
• 2.1 总RNA的制备
• 2.2 cDNA全长和阅读框的克隆、鉴定和序列分析
• 3. 讨论
• 第四章 九孔鲍铁蛋白表达分析
• 1. 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2. 结果和讨论
• 2.1 PCR最佳循环数的确定
• 2.2 不同组织中表达分析
• 2.3 LPS刺激后血淋巴细胞中mRNA的表达分析
• 第五章 九孔鲍铁蛋白的原核表达、鉴定及多克隆抗体的制备
• 1. 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2. 结果
• 2.1 原核表达载体的构建
• 2.2 重组蛋白的表达、纯化、Western blot分析及多克隆抗体的制备
• 3. 讨论
• 第六章 活性衍生物对鲍铁蛋白基因的调控
• 1. 材料和方法
• 1.1 试剂和仪器
• 1.2 方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 第三部分 小结
• 1. 本文的主要结果和结论
• 2. 本文的创新点
• 3. 硕士在读期间发表或完成论文
• 参考文献
• 常见缩略语
• 致谢