论文摘要
目前认为从多个环节干预异种移植排斥反应才有可能使动物器官应用于临床。本实验采用受精卵显微注射技术将本室构建的人α1,2-岩藻糖苷转移酶（HT）基因、人衰变加速因子（DAY）和人膜反应性溶解抑制物（CD59）基因构件导入到小鼠的受精卵的雄原核中,通过受精卵移植建立表达多基因的转基因小鼠,观察这些基因转移小鼠抗异种移植超急性排斥反应（HAR）的效果,并对其抗急性血管排斥反应（AVR）的机制进行初步研究。 第一部分人衰变加速因子重组质粒的构建 目的 构建含杂合增强子UI的人DAF重组基因,应用于转基因动物克服异种器官移植排斥反应的研究。方法 Clal/EcoRI双酶切质粒pSP73得到UI增强子插入片段（0.3Kb）,将其插入pBluescriptⅡSK+克隆载体的相应酶切位点之间;XbaI/BamHI双酶切质粒pGEM-7zf-DAF,得到含人ICAM-2启动子及DAF cDNA序列的插入片段（3.7Kb）,将其也插入到pBluescriptⅡSK+克隆载体的相应酶切位点之间。随后转化细菌,阳性转化菌落质粒抽提及酶切鉴定。设计引物行PCR特异扩增检验。结果 特异性3组酶切重组载体均产生了符合要求的相应条带;PCR扩增出特异的330bp及321bp的片断,符合设计要求。结论 含杂合增强子UI的人DAF重组基因构建成功。 第二部分人HT/CD59及DAF基因转移与转基因鼠的制备 目的 制备转移人HT/CD59双基因和人DAF单基因的首代转基因小鼠。方法 限制性内切酶NotI/PvuI双酶切人HT基因重组质粒得到2.85kb的转基因
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