论文摘要
中药石斛为兰科石斛属金钗石斛、铁皮石斛或马鞭石斛及其近似种的新鲜或干燥茎,具益胃生津和滋阴清热的功能。野生石斛自然繁殖率低,生长缓慢,随着资源的减少,人工栽培的药材已经成为其药材的主要来源。由于石斛品种多样和混乱,药材质量不稳定,目前药材质量评价还没有可参考的依据。美花石斛是2000版《中华人民共和国药典》中石斛的来源环草石斛的原植物之一,本文以野生美花石斛（Dendrobium loddigesii Rolfe）为材料进行质量研究。在查阅大量文献资料基础上,通过含量测定、指纹图谱等药材质量评价方法的建立,对所采集的不同产地、不同栽培方式、不同年龄和采收期、不同加工方法的环草石斛药材质量进行了分析,比较了环草石斛药材与所收集的石斛属其他近似种石斛的质量差别,为环草石斛药材质量标准的制定提供参考依据。主要研究结果如下:（1）建立了环草石斛中总多糖的含量测定方法;环草石斛药材紫外指纹图谱的测定方法;通过对10批环草石斛药材高效液相指纹图谱的比较分析,建立了环草石斛药材的高效液相指纹图谱,其中9个色谱峰作为共有峰,利用指纹图谱相似度评价软件进行分析,10批药材的相似度在0.8230.997之间。采用液质联用的分析作为补充,在已确定的环草石斛HPLC指纹图谱基础上利用高效液相色谱-离子阱质谱联用技术通过质谱碎片信息,结合参考文献推测了指纹图谱中的2个成分的化学结构,分别是5号峰:石斛宁（shihunine）、9号峰:石斛酚（moscatilin）。（2）建立了环草石斛药材总生物碱的定性分析方法,从药材中粗分到了总生物碱,并进行了薄层定性,通过高效液相色谱分析粗品中主要色谱峰与指纹图谱中5号峰保留时间吻合,进一步确证指纹图谱中5号峰为生物碱类成分。（3）比较分析了不同产地、不同栽培方式环草石斛药材。比较采自贵州、广西、云南、越南等地的环草石斛药材发现,贵州环草石斛药材的多糖含量较高,指纹图谱中峰的数目较多,各峰的峰面积比值较大;贵州贞丰的环草石斛多糖含量最高,达到17.06%。不同栽培方式环草石斛药材的比较发现,光照和温度对石斛的生长有很大的影响。阴坡栽培的环草石斛多糖含量和指纹图谱峰面积明显高于阳坡,而阳坡栽培采取树下遮阴的方式益于药材中有效成分的积累。（4）环草石斛不同部位的多糖含量茎>叶>根,紫外指纹图谱除石油醚系统外均存在明显的区别,尤其以叶的图谱差别最大,根中所含的成分种类较少,但根中所含化学成分与茎中近似;高效液相指纹图谱色谱峰数目根<茎<叶,根茎叶中成分区别较大。（5）比较分析了不同年龄和不同采收时间环草石斛药材。不同种苗来源环草石斛多糖含量随年龄的变化趋势一致,前两年呈上升趋势,第三年开始下降。相同年龄比较,高芽苗移栽药材较组培苗移栽药材的多糖含量高。不同采收时间环草石斛多糖含量从4月到第二年1月总体上升后到9月达到最高,12月份略有下降,动态分析可知环草石斛多糖含量高峰出现在秋冬季节。高效液相指纹图谱分析发现,组培苗移栽不同年龄环草石斛药材色谱峰数目随年龄的增加而增多,2年生茎在20min和46min左右（8号峰附近）出现了两个特征峰;高芽苗移栽环草石斛药材指纹图谱4年生茎的相似度较低,色谱峰数目前三年随年龄增加而增多,第四年降低。2年生环草石斛药材不同采收时间指纹图谱中色谱峰数目多于3年生药材,7月到第二年1月各成分的峰面积比值都较大,说明这期间环草石斛药材中的各种成分都有积累,这时进行采收药材的质量较好。（6）研究了环草石斛药材的加工方法,比较各种加工方法加工后药材的外观性状和内在成分,确定了环草石斛药材的最佳加工方法为开水烫后边搓边烘,烘干温度60℃,为美花适合的加工提供了量化指标。（7）生物碱类成分的TLC比较发现,球花石斛、密花石斛、鼓槌石斛、马鞭石斛、金钗石斛、翅梗石斛、束花石斛和环草石斛中金钗石斛、束花石斛、环草石斛含有生物碱类成分,与石斛碱对照品共薄层,只有金钗石斛与石斛碱对照品在同一位置显相同斑点,可以说明其余种石斛中不含有石斛碱或量非常少。紫外指纹图谱光谱数据的聚类结果将环草石斛单独分为一类,说明该方法能起到鉴别环草石斛的作用。比较了石斛属7种不同种石斛与环草石斛的高效液相指纹图谱,在同一色谱条件下各种石斛的指纹图谱存在很大的差别,说明各种石斛在成分上存在很大的差异。