建鲤雌核发育及人工转性的研究

论文摘要

鱼类中，雌雄性别成熟迟早以及生长速度存在性别差异是普遍现象。在长江流域的天然水域中，大部分雄性鲤鱼一龄性成熟，而雌性需要二龄才能性成熟，二龄雌性鲤鱼的平均体重比同龄的雄性鲤鱼高出约30％。在池养条件下，自性腺开始分化时，雌性鲤鱼就显示出比雄性生长迅速的趋势。如果能培育出全雌鲤鱼，仅利用性别的生长差异，就可增产10％。因此，全雌鲤鱼育种不仅具有重要的理论意义，而且具有直接的生产意义。 培育全雌鲤的关键技术是雌核发育和人工转性。因此本文拟以优良鲤鱼品种建鲤为研究对象，进行了人工雌核发育及人工转性研究，为全雌建鲤育种打基础。在优化紫外灭活精子有关参数的基础上，用紫外灭活的红鲫精子刺激建鲤卵子雌核发育，然后在2-细胞期进行热休克处理，加倍染色体，以较高比率获得了雌核发育育苗。当雌核发育鱼苗长至1.0-1.5cm，立即投喂含17α-甲基睾丸酮的饲料进行人工转性。在转性鱼中，出现了Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅳ型四种类型。建鲤和红鲫之间存在着广泛的、显著的扩增条带差异，RAPD技术可准确地区分建鲤和红鲫。近20个引物的分析表明，Ⅰ型鱼表现出与建鲤完全相同的带型，未见红鲫基因，Ⅳ型鱼则同时出现建鲤和红鲫的条带，因此，Ⅰ型为雌核发育鱼，Ⅳ型为杂交鱼。Ⅱ型和Ⅲ型则有待进一步鉴定。同时，用流式细胞仪测定了发育正常的Ⅰ型雌核发育鱼和对照组建鲤的DNA含量。雌核发育鱼DNA含量与对照组DNA含量没有显著差异，说明Ⅰ型雌核发育鱼为正常的二倍体。 在优化紫外灭活精子有关参数的基础上，用紫外灭活的红鲫精子刺激建鲤卵子雌核发育，然后在2-细胞期进行热休克处理，加倍染色体，以较高比率获得了雌核发育鱼苗，初步建立了建鲤人工雌核发育技术；以灭活的异源精子进行雌核发育诱导，并结合RAPD分析和DNA含量测定，可准确地鉴别雌核发育鱼；人工转性成功率75％，并获得了“假雄性”建鲤39条。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 文献综述：鱼类的雌核发育研究
• 1.雌核发育后代遗传性状的研究
• 2.雌核发育的细胞遗传学研究
• 3.蛋白质标记研究
• 4.DNA标记的研究
• 第二章 建鲤雌核发育及人工转性的研究
• 1.前言
• 2.材料与方法
• 2.1 材料来源
• 2.2 方法
• 2.2.1 催产
• 2.2.2 精子的遗传失活
• 2.2.3 雌核发育
• 2.2.4 染色体加倍
• 2.2.5 孵化
• 2.2.6 雌核发育后代的人工转性
• 2.2.7 雌核发育鱼的鉴别
• 2.2.7.1 RAPD分析
• 2.2.7.2 DNA含量测定
• 2.2.8 人工转性后生理性别检查
• 3.结果
• 3.1 精子灭活实验
• 3.1.1 精液稀释倍数对精子存活率的影响
• 3.1.2 精子灭活最佳照射剂量的确定
• 3.2 染色体加倍
• 3.3 雌核发育
• 3.4 雌核发育后代经人工转性后的形态及其分类
• 3.5 雌核发育鱼的鉴别
• 3.5.1 RAPD分析区分雌核发育鱼与杂交鱼
• 3.5.2 DNA含量测定确定雌核发育鱼的倍性
• 3.6 人工转性结果
• 4.讨论
• 4.1 精子灭活实验的影响因素
• 4.2 雌核发育后代的鉴别
• 4.3 雌核发育的染色体加倍
• 4.4 鱼类雌核发育中的“异精生物学效应”现象
• 4.5 全雌鲤育种
• 4.6 通过雌核发育快速建立纯系
• 5.结论
• 参考文献
• 致谢