论文摘要
拓扑替康对离体宫颈癌细胞的放射增强作用前言拓扑替康是DNA拓扑异构酶I抑制剂，与DNA拓扑异构酶I形成稳定的双链复合物，阻断DNA链断裂的修复，导致细胞死亡。目前，拓扑替康在卵巢癌、结肠癌和肺癌中显示了良好的临床疗效，在中晚期宫颈癌同步放化疗中也显示了一定的效果。体外研究表明，拓扑替康对某些肿瘤细胞株有较强抑制作用，并有一定的放射增敏作用。在鼻咽癌、消化道肿瘤和肺癌中拓扑替康放射增敏作用已有报道，但对宫颈癌的研究报道尚少。本实验通过克隆形成分析实验和流式细胞仪细胞周期分析法探讨拓扑替康对人宫颈癌细胞系Hela的放射增强作用及其对细胞周期的影响，为提高宫颈癌的放射疗效提供科学依据。材料与方法1、通过MTT法得到拓扑替康对宫颈癌细胞系Hela的IC50，实验时用低于IC50的不同浓度的拓扑替康作用Hela细胞24小时，分成8组。用直线加速器6MV的X线进行单次照射。用克隆形成法经Graphpad prism 4 Demo版软件，利用多靶单击模型绘制细胞存活曲线，获得不同处理条件下的放射增敏比。2、流式细胞仪检测细胞周期分布。3、统计学分析：实验时设两个平行样重复2次，结果以（?）±s表示。所有统计学处理均在SPSS13.0软件包中进行，两组间均数比较用t检验，多组间均数比较用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验法，P＜0.05为有统计学意义。结果1、经不同浓度的拓扑替康处理后，其放射增敏比分别为：1.09、1.31、1.37、1.48、1.45、1.46、1.50。2、拓扑替康可引起HeLa细胞发生G2／M期阻滞，照射后4小时、24小时、48小时，G2／M期比率均增高，其P值分别是0.005、0.015、0.023，提示拓扑替康对Hela细胞周期分布的影响在早期（4小时）时较明显。讨论1、本研究显示在拓扑替康较低浓度时（≤8ug／ml），随着拓扑替糠浓度的增加，SER逐渐增大，为1.09、1.31、1.37、1.48；当拓扑替康的浓度超过20％IC50时（≥12ug/ml），SER变化减小，分别为1.45、1.46、1.50，显示拓扑替康的放射增敏作用减弱，而其细胞毒性则增大。提示拓扑替康的放射增敏作用在较低浓度时（≤20％IC50）较为明显。所以不适合选用高浓度的拓扑替康作为放射增敏剂。2、放射可以导致肿瘤细胞DNA链断裂和改变细胞周期进程，对不同细胞可引起G1期、G2／M期或S期阻滞。本实验研究表明，经拓扑替康干预后，可引起HeLa细胞发生G2／M期阻滞，照射后4小时、24小时、48小时，G2／M期比率均增高，其P值分别是0.005、0.015、0.023，提示拓扑替康对Hela细胞周期分布的影响在早期（4小时）时较明显。结论1、拓扑替康对宫颈癌Hela细胞有一定的放射增敏作用。在低剂量范围内（≤20％IC50），放射增敏作用随剂量增加而增加；而当达到一定的剂量浓度后，药物剂量增加，但放射增敏的作用减弱。2、拓扑替康提高宫颈癌Hela细胞的放射敏感性，其机制可能是通过引起G2／M期阻滞而产生的；本试验表明，拓扑替康对Hela细胞周期分布的影响在早期（4小时）时较明显。综上所述，可见拓扑替康对宫颈癌Hela细胞有一定的放射增敏作用，其机制可能是通过引起G2／M期阻滞而产生的。