脂联素球状结构域（gAd）改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的效果与机制研究

论文摘要

目的探讨脂联素球状结构域（globular domain of adiponectin, gAd）改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的效果及其可能的机制。方法复苏冻存的3T3-L1前脂肪细胞株,置37℃细胞孵育箱中,5%CO2条件下培养并诱导分化为成熟的3T3-L1脂肪细胞,用细胞形态学及油红O染色法鉴定细胞。用梯度透析法复性原核基因重组的gAd蛋白,用考马斯亮蓝法测定gAd蛋白含量。用软脂酸（Plamotic acid, PA）制备3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（insulin resisitent, IR）模型。用不同浓度gAd （250ng/mL,500ng/mL, 1000ng/mL）干预己产生IR的脂肪细胞5h,设空白对照组,用葡萄糖氧化酶法测定细胞培养液葡萄糖含量,用实时定量PCR法检测各组3T3-L1脂肪细胞IRS-1 PI-3K、PKB、GLUT-4、AMP、CPT-Ⅰ的mRNA表达水平。用Western blot检测AMPK Thr-172及IRS-1磷酸化水平。用SPSS 17.0统计分析软件建立数据库分析数据,数据以均数±标准差（x-±s）表示,检验水准取α=0.05。结果1.3T3-L1脂肪细胞IR模型的制备不同浓度的PA （0.25mmol/L 0.5 mmol/L、1.0mmol/L）作用于分化成熟的3T3-L1脂肪细胞24h可抑制葡萄糖的摄取,与对照组相比各实验组葡萄糖摄取率分别下降5.25%、10.29%、14.54%。说明PA具有引起3T3-L1脂肪细胞产生IR的作用,且1.0 mmol/L PA作用于3T3-L1细胞24h抑制细胞葡萄糖摄取的效果最显著。2.gAd对3T3-L1脂肪细胞IR模型葡萄糖摄取能力的影响不同浓度的gAd （250ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL）作用于产生IR的3T3-L1脂肪细胞,可促进脂肪细胞葡萄糖摄取（F=35.499,r=-0.883,P=0.005）。与对照组相比,gAd250 ng/mL时就可显著促进脂肪细胞葡萄糖摄取（p=0.000）。3.gAd对3T3-L1脂肪细胞IR模型AMPK通路的影响gAd可增加3T3-L1脂肪细胞IR模型AMPK （F=359.374, r=0.986, P=0.000）、CPT-I （F=180.234, r=0.973, P=0.000）基因的表达,呈剂量依赖关系。各实验组与对照组比较均有显著差异（P<0.01）,各实验组组间比较也有显著差异（P<0.01）。Western blot结果显示, gAd可增加3T3-L1脂肪细胞IR模型AMPK Thr-172磷酸化水平,且随着gAd浓度的增加,AMPK Thr-172磷酸化水平逐渐增强（F=269.407,r=0.982,P=0.000）。4.gAd对3T3-L1脂肪细胞IR模型胰岛素PI-3K途径的影响与对照组相比,250 ng/mL gAd组可增加3T3-L1脂肪细胞IR模型GLUT-4mRNA的表达（P=0.024）,但IRS-1 （P=0.324） PI-3K （P=0.125）、PKB （P=0.748） mRNA表达较对照组无显著差异；500 ng/mL gAd组IRS-1（P=0.031）、PI-3K（P=0.002）、PKB（P=0.01）.GLUT-4（P=0.000）的表达均比对照组显著增加,且PI-3K （t=-3.66 P=0.022）、PKB （t=-4.161 P=0.014）、GLUT-4（t=-15.039,P=0.000）的表达均较250 ng/mL gAd组显著增加；1000 ng/mLgAd组IRS-1 （P=0.031）. PI-3K （P=0.000）、PKB （P=0.000）、GLUT-4 （P=0.000）的表达均比对照组显著增加,且GLUT-4 （t=10.483, P=0.000） mRNA的表达较500 ng/mL gAd组显著增加。Western blot结果显示,gAd可增加3T3-L1脂肪细胞IR模型IRS-1磷酸化水平,且随着gAd浓度的增加,IRS-1磷酸化水平逐渐增加（F=360.345,r=0.968,P=0.000）。结论1.gAd可促进3T3-L1脂肪细胞IR模型葡萄糖的摄取。2.gAd可能是通过促进AMPK Thr-172磷酸化,激活AMPK,增加CPT-I的活性,促进脂肪酸的氧化,改善3T3-L1脂肪细胞的IR。3.gAd可增加胰岛素P13K通路IRS-1、PI3K、PKB、GLUT-4基因的表达,并使IRS-1磷酸化水平增加,改善3T3-L1脂肪细胞的IR。

论文目录

• 附图附表清单
• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩写词表
• 前言
• 第一章 gAd对3T3-L1脂肪细胞IR模型葡萄糖摄取能力的影响
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 第二章 gAd对3T3-L1脂肪细胞IR模型AMPK通路的影响
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 第三章 gAd对3T3-L1细胞IR模型胰岛素P13K途径的影响
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 研究结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 个人简介
• 学习经历
• 科研经历
• 致谢