论文摘要
目的:研究槲皮素（quercetin,Que）诱导的人乳腺癌MCF-7细胞死亡中的作用,初步探讨自噬和凋亡机制在MCF-7细胞死亡中的相关性。方法:用不同浓度的Que处理MCF-7细胞,采用MTT法测定Que对MCF-7细胞增殖的抑制作用;应用M0DC荧光染色,Hochest33258染色,AO/EB染色观察给药后自噬和凋亡的发生;分别用ALLN抑制m-calpain、z-IETD-FMK抑制caspase 8、E64d抑制Cathepsins,采用MTT法结合LDH漏出率、免疫荧光法和流式细胞仪研究抑制自噬与凋亡机制在Que诱导的MCF-7细胞死亡中的关系。结果:Que对MCF-7细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间、剂量依赖性;（AO/EB）和MDC荧光染色显示Que给药后可诱导MCF-7细胞发生自噬和凋亡,24h自噬和凋亡同时存在,自噬特异性蛋白LC3被激活;LDH漏出率实验结果表明,在Que给药前用3-MA阻断自噬或者氯喹（chloroquine,Chlo）碱化溶酶体,Que对MCF-7细胞的细胞毒性作用增强;碱化溶酶体后,流式细胞仪检测结果显示,Que可使MCF-7细胞的凋亡峰提前,免疫荧光法检测发现LC3表达减少。应用caspase 8抑制剂可增强Que对MCF-7细胞的抑制作用,但是cathepsins广谱抑制剂E64d能降低Que对MCF-7的生长抑制。结论:Que能明显抑制MCF-7细胞的生长,并诱导其发生自噬和凋亡。在Que诱导的MCF-7细胞的死亡中,自噬激活能降低Que对MCF-7细胞的毒性;Que也可能通过激活溶酶体酶,促进MCF-7细胞走向自噬、凋亡或另一种死亡方式。溶酶体可能是MCF-7细胞发生自噬和凋亡的枢纽。
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