大鼠急性酒精性肝损伤发病机制及水飞蓟素对其保护作用的研究

论文摘要

研究背景乙醇引起的肝损伤的发病机制至今尚未明确,其中氧化应激和膜磷脂过氧化作用在急性酒精性肝损伤的发生和发展起重要作用。CYP2E1是细胞色素P450的酒精诱导形式,不仅参与了药物的代谢,而且还能催化乙醇的代谢并产生具有更强毒性的代谢产物,由其所引起的氧化应激和膜磷脂过氧化可在短期内导致肝脏的损伤,是酒精性肝损伤的重要发病机制。水飞蓟素具有强力抗氧化性,是一种安全、稳定、有效的保肝药物,但其对急性酒精性肝损伤的保护作用目前研究很少,且具体作用机制也尚不明确。因此,建立急性酒精性肝损伤实验动物模型,探讨乙醇引起的肝损伤的发病机制及药物防治甚为重要。目的建立急性酒精性肝损伤模型,探讨水飞蓟素对大鼠急性酒精性肝损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法32只雄性SD大鼠被随机分为4组:正常对照组、模型对照组、水飞蓟素低剂量组和水飞蓟素高剂量组,每组8只。除正常组等剂量以生理盐水灌胃外,其余各组均以乙醇灌胃,5 g/kg,水飞蓟素各剂量组在乙醇灌胃1 h后再分别给予水飞蓟素100 mg/kg和200 mg/kg灌胃,连续5 d（1次/d）,末次乙醇灌胃并禁食6小时后将全部大鼠麻醉并处死,腹主动脉取血,生化法检测大鼠血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase ,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase ,AST）活性、总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride ,TG）含量和肝匀浆超氧化物歧化酶（superoxide dismutase ,SOD）活性、丙二醛（malondialdehyde ,MDA）含量。肝组织标本HE染色后观察肝脏病理形态学改变,并用免疫组化法测定肝组织中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）表达,逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）检测肝脏细胞色素P450 2E1（Cytochrome P450 2E1,CYP2E1）mRNA的表达。结果成功复制出大鼠急性酒精性肝损伤模型。与正常对照组比较,模型对照组肝细胞可见明显脂肪变性,肝细胞肿胀明显,肝小叶内可见炎症细胞浸润和肝细胞点状坏死;血清中ALT、AST活性明显增高（P<0.05）;肝组织匀浆中MDA含量显著增高（P<0.01）;肝组织中TNF-α和IL-1β表达明显升高（P<0.01）;肝脏CYP2E1 mRNA的表达明显增高（P<0.01）。与模型对照组比较,水飞蓟素各剂量组肝细胞脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度均降低,肝组织病理变化程度明显减轻;血清ALT活性、肝匀浆MDA水平明显降低（P<0.01和P<0.05）,SOD活性升高（P<0.05）,肝组织中TNF-α和IL-1β表达明显减少（P<0.01）,肝脏CYP2E1 mRNA的表达明显减少（P<0.05）,水飞蓟素高剂量组血清AST活性也明显降低（P<0.01）。结论水飞蓟素对大鼠急性乙醇所致肝损伤具有保护作用,其机制可能与抗氧化应激、抗炎症、抑制TNF-α、IL-1β等细胞因子和炎症介质以及CYP2E1 mRNA的表达有关。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 1. 前言
• 2. 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 动物
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器、设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 水飞蓟素对大鼠急性酒精性肝损伤的保护作用
• 2.2.2 大鼠血清生化检测
• 2.2.3 肝匀浆SOD和MDA含量的测定方法
• 2.2.4 肝组织固定、切片、染色
• 2.2.5 肝组织病理结果评分
• 2.2.6 TNF-α、IL-1β的免疫组化染色方法
• 2.2.7 免疫组化结果的判断
• 2.2.8 肝脏总RNA 提取和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）
• 2.2.9 RT-PCR 结果判断
• 2.3 数据处理和统计分析
• 3. 结果
• 3.1 大鼠急性酒精性肝损伤模型的建立
• 3.2 水飞蓟素对大鼠急性酒精性肝损伤的干预研究
• 4. 讨论
• 4.1 大鼠急性酒精性肝损伤模型的建立
• 4.2 酒精性肝损伤大鼠肝匀浆中 SOD、MDA
• 4.3 酒精性肝损伤大鼠肝脏 TNF-α和 IL-1β表达的变化
• 4.4 酒精性肝损伤大鼠肝脏 CYP2E1 表达的变化
• 4.5 水飞蓟素对大鼠急性酒精性肝损伤干预作用
• 5. 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述