淡紫拟青霉在作物根围及土壤中的定殖研究

论文摘要

淡紫拟青霉（paecilomyces lilacinus）是多种植物寄生线虫的寄生真菌,是一种有效的生防菌。本文对淡紫拟青霉耐多菌灵突变株PL221在作物根围及土壤中的定殖进行研究。淡紫拟青霉出发菌株36-1耐多菌灵浓度为2.0μg/ml,通过紫外诱变获得耐药性稳定、产孢量大等生物特性较优的突变菌株PL221,其耐药性浓度为30.0μg/ml,以此作为筛选标记进行定殖研究。淡紫拟青霉突变菌株PL221生物学特性测定表明:菌株孢子萌发率、菌株发酵液对线虫致死率等方面优于出发菌株。对于目的菌株的回收检测,筛选适宜的分离培养基对分离效果有至关重要的影响,在OHIO-agar、Gause’s、Czapek’s、PSA、Martin’s五种培养基中,筛选并确定OHIO-agar培养基为较适的从土壤和作物根围分离淡紫拟青霉的培养基。淡紫拟青霉在土壤中的存活动态表明:PL221菌株以固体发酵物拌土及孢子液浇灌的形式施入土壤,固体发酵物拌土较孢子液浇灌的施入方式能使菌株在土壤中有相对高的存活量。淡紫拟青霉在土壤介质中的存活期达60天以上。实验研究了淡紫拟青霉PL221菌株在不同作物类型和品种、土壤类型、施入方式中的盆栽和田间定殖情况。初步了解了菌株在各作物及土壤中根基土、根围、根内的定殖差异性。盆栽5种作物定殖测定表明,在各作物的根基土、根围、根内均能检测到目的菌株。菌株在作物根基土测定的生物量在106的数量级上,玉米、番茄、豇豆的平均生物量略高。作物根围测定番茄、黄瓜的生物量较其他品种略稳定,在105的数量级上。根内生物量在102至104数量级之间。PL221菌株在田间9种作物的定殖测定中,菌株各作物根基土检测的生物量在104至106的数量级之间,菌株在田间玉米根基土的定殖能力弱于其他各作物,番茄、黄瓜表现为较好的定殖能力;根围检测生物量在103至105数量级之间。PL221菌株能在番茄和玉米5个不同品种根基土、根围、根内定殖。菌株在根基土的定殖生物量高于根围,根围高于根内。番茄和玉米根基土平均定殖量分别在106和105的数量级上,根围测定在104的数量级上,根内定殖的测定量不稳定。5个番茄品种中PL221菌株在特大品种根部的定殖能力略优于其他品种。在5个玉米自交系中,PL221菌株在玉米X178品种根基土及根围的定殖测定量较稳定,优于其他品种。PL221菌株能在河南潮土（HN）、湖北黄壤（HB）、广西黄棕壤（GX）三种不同土壤类型中种植的番茄和棉花植株根基土、根围、根内定殖。根基土的定殖生物量高于根围,根内检测不稳定。根基土和根围定殖生物量分别在106和104的数量级上PL221菌株以四种方式（浸种、浸根、孢子液浇灌、固体发酵物拌土）处理番茄植株,均能在植株根基土、根围、根内检测到目的菌株。菌株以孢子液浇灌、固体发酵物拌土的施入方式在番茄根基土和根围定殖较理想,定殖量在104至107的数量级之间。在根内测定中,浸根的处理方式较利于菌株在植物根内定殖。浸种方式的定殖效果不理想。对植株根系和茎杆做进一步组织分离,在各分离平板上的根系组织分离到目的菌落,进一步证明了淡紫拟青霉在植株根系内定殖。而在植株茎杆和叶片内亦能分离到目的菌株,初步证明淡紫拟青霉有可能在植株茎杆和叶片内定殖。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.淡紫拟青霉的研究进展
• 1.1 淡紫拟青霉的形态特征
• 1.2 淡紫拟青霉的控害作用
• 1.3 淡紫拟青霉对作物生长的影响
• 1.4 淡紫拟青霉对线虫的致病机理
• 1.5 淡紫拟青霉在分子生物学方面的研究应用
• 2.生防菌的定殖研究
• 2.1 淡紫拟青霉的定殖研究
• 2.2 其他生防菌的定殖研究
• 3.生防菌定殖研究中存在的问题
• 3.1 植物及根围微生物的影响
• 3.2 土壤类型对生防菌的定殖影响
• 3.3 生防菌与化学药剂的兼容性问题
• 3.4 基因标记在微生态研究中的运用
• 4.淡紫拟青霉的应用和推广
• 5.研究意义和目的
• 6.研究内容
• 第二章 淡紫拟青霉耐多菌灵突变株PL221的生物学特性
• 1.材料与方法
• 1.1 供试菌株与药剂
• 1.2 培养基
• 1.3 突变株的生物学特性测定
• 1.3.1 菌落颜色、形态观察
• 1.3.2 生长速度测定
• 1.3.3 产孢能力测定
• 1.3.4 孢子萌发率测定
• 1.3.5 发酵液对线虫致死率测定
• 1.3.6 菌液对根结线虫卵的寄生率
• 2.结果与分析
• 2.1 菌落颜色、形态观察
• 2.2 生长速度
• 2.3 产孢能力
• 2.4 孢子萌发率
• 2.5 发酵液对线虫致死率
• 2.6 菌液对根结线虫卵的寄生率
• 3.讨论
• 第三章 淡紫拟青霉PL221菌株在土壤中的定殖存活动态
• 1.材料与方法
• 1.1 供试菌株与仪器
• 1.2 培养基
• 1.3 施菌处理
• 1.4 检测方法
• 1.5 菌落形成单位
• 1.6 气象资料
• 1.7 数据统计分析
• 2.实验设计
• 2.1 PL221菌株最佳分离培养基的筛选
• 2.2 PL221菌株在土壤中的定殖测定
• 3.结果与分析
• 3.1 PL221菌株最佳分离培养基的筛选
• 3.1.1 五种培养基的分离效果
• 3.1.2 五种培养基的分离量
• 3.1.3 小结
• 3.2 PL221菌株在土壤中的定殖
• 3.2.1 气象因素对PL221菌株定殖生物量的影响
• 3.2.2 讨论
• 第四章 淡紫拟青霉PL221菌株在作物中的定殖测定
• 1.材料与方法
• 1.1 供试菌株与分离培养基
• 1.2 供试作物与土壤
• 1.2.1 供试作物
• 1.2.2 土壤类型及处理
• 1.2.3 作物种植和施菌
• 1.3 实验设计
• 1.3.1 PL221菌株在不同作物中的定殖测定
• 1.3.1.1 PL221菌株在盆栽作物中的定殖测定
• 1.3.1.2 PL221菌株在田间作物中的定殖测定
• 1.3.2 PL221菌株在相同作物不同品种中的定殖测定
• 1.3.2.1 PL221菌株在不同番茄品种中的定殖测定
• 1.3.2.2 PL221菌株在不同玉米品种中的定殖测定
• 1.3.3 PL221菌株在不同土壤类型棉花和番茄上的定殖测定
• 1.3.4 PL221菌株以不同施入方式在番茄上的定殖测定
• 1.3.5 淡紫拟青霉PL221菌株的组织分离鉴定
• 1.4 菌株定殖测定方法
• 1.4.1 淡紫拟青霉在作物根基土壤中的定殖测定
• 1.4.2 淡紫拟青霉在作物根围的定殖测定
• 1.4.3 淡紫拟青霉在作物根内的定殖测定
• 1.5 组织分离鉴定方法
• 1.6 气象资料
• 1.7 数据统计分析
• 2.结果与分析
• 2.1 PL221菌株在不同作物中的定殖
• 2.1.1 PL221菌株在盆栽作物中的定殖
• 2.1.1.1 根基土定殖
• 2.1.1.2 根围定殖
• 2.1.1.3 根内定殖
• 2.1.1.4 小结
• 2.1.2 PL221菌株在田间作物中的定殖
• 2.1.2.1 根基土定殖
• 2.1.2.2 根围定殖
• 2.1.2.3 根内定殖
• 2.1.2.4 PL221菌株田间作物定殖测定量与气象因素的相关性
• 2.1.2.5 小结
• 2.2 PL221菌株在相同作物不同品种中的定殖
• 2.2.1 PL221菌株在番茄不同品种中的定殖
• 2.2.1.1 根基土定殖
• 2.2.1.2 根围定殖
• 2.2.1.3 根内定殖
• 2.1.1.4 小结
• 2.2.2 PL221菌株在不同玉米品种中的定殖
• 2.2.2.1 根基土定殖
• 2.2.2.2 根围定殖
• 2.2.2.3 根内定殖
• 2.2.2.4 小结
• 2.3 PL221菌株在不同土壤类型番茄和棉花上的定殖
• 2.3.1 PL221菌株在不同土壤类型番茄上的定殖
• 2.3.1.1 根基土定殖
• 2.3.1.2 根围定殖
• 2.3.1.3 根内定殖
• 2.3.1.4 小结
• 2.3.2 PL221菌株在不同土壤类型棉花上的定殖
• 2.3.2.1 根基土定殖
• 2.3.2.2 根围定殖
• 2.3.2.3 根内定殖
• 2.3.2.4 小结
• 2.4 不同施入方式对PL221菌株定殖的影响
• 2.4.1 根基土定殖
• 2.4.2 根围定殖
• 2.4.3 根内定殖
• 2.4.5 小结
• 2.5 淡紫拟青霉PL221菌株的组织分离鉴定结果
• 3.结论与讨论
• 研究前景与展望
• 参考文献
• 致谢