脓毒症脾细胞损伤机制的探讨及丹参保护作用的实验研究

论文摘要

目的复制脓毒症大鼠模型，动态观察脓毒症对脾组织细胞的影响；观察肿瘤坏死因子（TNF-a）和氧自由基（OFR）含量的变化对脾细胞凋亡的影响，以探讨脓毒症脾细胞凋亡的机制；观察中药丹参对此过程的干预作用，以期为脓毒症的临床治疗提供实验依据。方法选用体重180-250g的雄性Wistar大鼠96只，随机分为对照组（control group，Control）、假手术组（sham operated group，Sham）、模型组（cecal ligation and puncture group，CLP）和丹参干预组（salvia miltiorrhizatreated group，Salvia），每组24只。每组又分6h、12h、24h和48h四个时间点，每时间点6只。Control组动物仅给3％戊巴比妥钠30mg／kg腹腔麻醉；Shma组仅行盲肠翻动，不行结扎和穿刺；CLP组行盲肠结扎后用20号针贯穿盲肠3次制成脓毒症模型；Salvia组于行CLP后腹腔注射丹参注射液10g（1.0g／ml）。每组动物均于相应时间点麻醉活杀，腹主动脉取血，用于检测血清中TNF-a、MDA水平变化及GXH-Px活力测定。同时取其脾脏，分别用于脾组织匀浆的制备和病理组织学检查。采用双抗夹心ABC-ELISA法测定TNF-a，采用硫代巴比妥酸法测定MDA、采用DTNB直接法测定GSH-Px、采用终末脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediateddUTP nick end labeling，TUNEL）技术检测脾细胞凋亡情况。采用多元性回归分析筛选影响脾细胞凋亡的因素。结果（1）脓毒症模型的确认：CLP组腹腔炎症的严重程度与时间呈依赖关系，腹腔炎症在48h达到高峰，腹腔内有大量脓性或血性渗出液，而Control组与Sham组腹腔无明显的炎症过程。（2）血清和脾组织TNF-a的变化与Control组相比，Sham组TNF-a水平在各时间点均增高（p＜0.01），并且在12时间点达到峰值，其后逐渐下降。CLP组与Sham组相比，血清TNF-a水平在6h升高，于24h达到峰值。Salvia组也在6h升高，但峰值滞后于CLP组，于48h达到其峰值，并在24h显著低于CLP组（p＜0.01）。（3）血清和脾组织MDA的变化Control组和Sham组MDA水平未见明显差异，与Sham组相比，CLP组在6h时间点明显增高，于48h达到峰值。Salvia组血清MDA增高滞后于CLP组，在12h后开始增高，在48h达到峰值，并在12h和24h分别显著低于同时间点CLP组（p＜0.01）。（4）血清脾组织GSH-Px的变化Control组和Sham组血清GSH-Px未见明显变化，与Sham组相比，CLP组在6h降低，48h达到最低值。Salvia组GSH-Px降低滞后于CLP组，在12h后降低，也在48h达其最低值，水平接近于CLP组。Salvia组血清GSH-Px在6h、12h和24h三个时间点显著高于CLP组，（p＜0.01），（5）脾细胞凋亡的变化CLP组在6h时间点阳性率增加，在24h达到高峰，在48h时间点阳性率减少。Salvia组在6h阳性率开始增高，24h达到高峰，但其阳性率在12h和24h低于同时间点CLP组（p＜0.01）。（6）多元性回归分析结果：影响脓毒症大鼠脾细胞的凋亡的因素是血清MDA，脾组织MDA，脾组织TNF-a和脾组织GSH-Px。结论1．予Wistar大鼠施盲肠结扎穿孔术，成功地建立了大鼠脓毒症模型，可用于实验观察。2．脓毒症可致多器官功能障碍，脾脏即其靶器官之一，脾细胞凋亡是其损伤后的主要变化，而脓毒症引起的TNF-a含量增多及氧自由基代谢紊乱在其发生机制中起了重要作用。3．丹参可降低机体的TNF-a水平，调节自由基代谢，对脓毒症发病过程中脾组织起保护性作用，预防脾淋巴细胞过度凋亡引起的免疫抑制。

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