论文摘要
BHMT（Betaine homocysteine methyltransferase）,即甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶,是一种Zn2+依赖的巯基甲基转移酶。本实验通过PCR和RACE技术克隆了鲈鱼（Lateolabrax japonicus）BHMT基因全长,并对其进行了结构分析,通过RT-PCR方法检测了BHMT基因在鲈鱼各组织中的分布,同时利用RT-PCR和实时荧光定量PCR检测了盐度和甜菜碱对鲈鱼各组织中BHMT基因表达的影响,为今后研究BHMT功能及鱼类渗透压调节机制奠定基础。利用RT-PCR和SMART RACE的方法从鲈鱼肝脏中成功克隆了BHMT全长cDNA。该序列全长1461bp,5’端非翻译区1151bp,3’端非翻译区517bp,开放阅读框（ORF）1206bp,可编码一个由401个氨基酸残基组成的蛋白质,该蛋白质理论分子量为44.32kDa、等电点为7.21。氨基酸序列分析表明,BHMT基因具有较高的保守性,鲈鱼BHMT与黄鲈（Perca flavescens）、金头鲷（Sparus aurata）、大西洋鲑（Salmo salar）、斑马鱼（Danio rerio）、牙鲆（Paralichthys olivaceus）、非洲爪蟾（Xenopus laevis）、人（Homo sapiens）、黑猩猩（Pan troglodytes）、小鼠（Mus musculus）、牛（Bos taurus）等十个物种的同源性为77%93%,其中与黄鲈的同源性最高,为93%。BHMT具有Zn2+依赖的硫醇和硒醇甲基转移酶家族的结构特征,即具有G（ILV）NCX结构的基序A和具有（ALV）X（2）（LV）GGCCX（3）PX（2）I结构的基序B。利用RT-PCR法检测BHMT基因在鲈鱼肌、心、眼、脑、鳃、肝、肠、肾、脂、脾组织中的表达情况,结果表明该基因在鲈鱼肝、肠和肾三个组织中均有表达,其中肝脏组织的表达量最大。通过RT-PCR和实时荧光定量PCR的方法表明鲈鱼从盐度25的海水转入盐度12的海水后,肝、肠和肾BHMT基因表达量均有增加,而将鲈鱼从盐度为25的海水转入盐度为29的海水后,肝、肠和肾的BHMT基因表达量则减少。腹腔注射甜菜碱后,鲈鱼肝、肠和肾三个组织中的BHMT基因的相对表达量有显著的增加。结果表明,盐度刺激后对鲈鱼BHMT基因的表达量有显著影响,同时甜菜碱也可诱导鲈鱼BHMT基因的表达,说明BHMT在适应鱼类环境渗透压变化中起到重要的作用。