论文摘要
目的：1．探讨动脉粥样硬化（As）中医病因病机治则新认识，分析整理脉心康胶囊创制的理论基础及前期成果。2．通过载脂蛋白E基因敲除[ApoE（-／-）]小鼠整体体内实验及其腹腔巨噬细胞体外细胞培养实验，多层次、多靶点探讨脉心康抗As的作用原理特别是分子机制。方法：1．结合中医药文献、基础理论和临床实际，在对As中医病因病机治则传统认识回顾的基础上，进行创新性探讨；对脉心康的方药组成特色进行中西医结合分析，对脉心康的临床应用与基础研究成果进行分析整理。2．实验研究：（1）整体体内实验研究：ApoE（-／-）小鼠按随机数字表法随机分组，各组分别给予脉心康、洛伐他汀、罗格列酮、生理盐水灌胃，正常对照组（正常C57BL／6J小鼠）给予生理盐水灌胃，各组与正常对照组分别于给药后第8周、第12周各处死一半，静脉取血，取主动脉标本固定、染色及相应处理。（2）细胞学实验研究：ApoE（-／-）小鼠腹腔巨噬细胞培养，各组分别给予脉心康、洛伐他汀、罗格列酮无菌含药血清，并与ox-LDL共孵育（泡沫化），分别观察0—72小时不同时相的指标变化。光镜及电镜下观察主动脉As病变及超微结构；激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内钙离子(Ca2+)；高效液相色谱法检测细胞内胆固醇及胆固醇酯；免疫组化法检测细胞、主动脉PPARγ、ABCA1、CD36蛋白表达；流式细胞仪检测CD36；原位杂交法检测细胞、主动脉PPARγ、CD36、ABCA1 mRNA表达；ELISA法检测血清、巨噬细胞培养液TNF-α、IL-1β。结果：1．明确了As及其易损斑块的气虚血瘀，毒损脉络病机和益气活血解毒治则创新思路，体现此治则的脉心康对As与高脂血症疗效显著，具有降脂、抗炎、抗氧化、保护血管内皮、抗As、抑制细胞外基质降解、稳定斑块等作用。2．实验研究：（1）整体体内实验研究：脉心康能使ApoE（-／-）小鼠As病理形态学及超微结构改变减轻，有助于斑块缩小稳定；脉心康组、罗格列酮组血管壁PPARγ、ABCA1 mRNA的表达显著增加，PPARγ、ABCA1蛋白的表达显著增加；脉心康组、洛伐他汀组血管壁CD36 mRNA表达及CD36蛋白的表达显著降低；脉心康组、洛伐他汀组、罗格列酮组血清TNF-a、IL-1水平显著降低。（2）细胞学实验研究：用含药血清干预ApoE（-／-）小鼠泡沫化腹腔巨噬细胞后，巨噬细胞内Ca2+浓度各组都有升高，脉心康、洛伐他汀、罗格列酮含药血清干预组Ca2+浓度显著低于生理盐水组和空白对照组；脉心康、罗格列酮组PPARγ及ABCA1mRNA表达和PPARγ及ABCA1蛋白表达较洛伐他汀、空白对照组和生理盐水组均显著增加；脉心康、洛伐他汀组CD36 mRNA表达与CD36蛋白表达均显著低于罗格列酮组、生理盐水组和空白对照组。脉心康组、洛伐他汀组及罗格列酮组细胞内总胆固醇、游离胆固醇及胆固醇酯含量显著低于生理盐水组和空白对照组。脉心康组、洛伐他汀组及罗格列酮组培养液TNFα、IL-1β较生理盐水组和空白对照组显著降低。结论：1．益气解毒活血方脉心康具有确切的降脂、抗炎、抗As与稳定易损斑块等作用。2．脉心康通过增加PPARγ、ABCA1mRNA表达，增加PPARγ、ABCA1蛋白表达，降低CD36 mRNA表达和蛋白表达，减少巨噬细胞内胆固醇及胆固醇酯的含量，降低巨噬细胞钙超载，减少巨噬细胞释放TNFα、IL-1β，达到抗炎、降低巨噬细胞的趋化性、抗细胞泡沫化，从而保护动脉、保护超微结构、抗As及稳定斑块，对防治As和预防急性冠脉综合征等心脑血管事件有重要意义。
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提要英文摘要引言第一部分 脉心康干预动脉粥样硬化的中医药学理论探讨、基础研究与临床应用一、动脉粥样硬化的中医病因与病机新探讨（一） 动脉粥样硬化的概念（二） 中医对动脉粥样硬化病因的认识（三） 动脉粥样硬化的虚、瘀、毒、痰、湿病机二、脉心康干预动脉粥样硬化的中医药学理论基础探讨（一） 动脉粥样硬化的中医治则探讨（二） 脉心康的方药分析与特色三、脉心康的初步基础研究（一） 食饵性高脂血症大鼠实验（二） 载脂蛋白E基因敲除小鼠体内实验（三） 载脂蛋白E基因敲除小鼠体外肝细胞原代培养实验四、脉心康的初步临床应用研究（一） 脉心康防治高脂血症（二） 脉心康胶囊防治颈动脉粥样硬化五、脉心康的深入研究与应用展望参考文献第二部分 脉心康干预载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化及其巨噬细胞泡沫化的分子机制研究Ⅰ 载脂蛋白E基因敲除小鼠整体体内实验部分实验一 脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉粥样硬化影响的病理形态学观察一、实验材料（一） 仪器（二） 实验药品及动物二、实验动物分组给药及实验方法三、大体观四、光镜观察五、电子显微镜观察实验二 脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠血清TNF-α和IL-1β的影响一、实验材料二、实验方法三、统计学处理四、检测结果实验三 免疫组化法检测脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉PPARγ、ABCA1、CD36蛋白表达的调控作用一、实验材料二、实验方法三、统计学处理四、主动脉PPARγ、ABCA1、CD36蛋白表达检测结果实验四 原位杂交法检测脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉PPARγ、ABCA1、CD36 mRNA表达的调控作用一、实验材料及方法二、统计学处理三、主动脉PPARγ、ABCA1、CD36 mRNA表达检测结果Ⅱ 载脂蛋白E基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞体外细胞培养实验部分实验一 激光共聚焦显微镜检测脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内钙离子浓度的影响一、实验材料二、实验方法三、统计学处理四、结果实验二 免疫组化法检测脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞PPARγ、ABCA1蛋白表达的调控作用一、实验材料二、实验方法三、统计学方法四、实验结果实验三 流式细胞术检测脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞CD36蛋白表达的调控作用一、实验材料二、实验方法三、统计学处理四、实验结果实验四 原位杂交法检测脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞PPARγ、ABCA1、CD36m RNA表达的调控作用一、实验材料二、实验方法三、统计学处理四、结果实验五 ELISA法检测脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞培养液TNF-α、IL-1β的影响一、实验材料二、实验方法三、统计学处理四、实验结果实验六 高效液相色谱法检测脉心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇及胆固醇酯的影响一、实验材料二、实验方法三、统计学处理四、实验结果讨论一、现代医学对动脉粥样硬化机理的研究进展二、载脂蛋白E基因敲除小鼠在动脉粥样硬化研究中的价值三、泡沫细胞的形成及药物干预的机制（一） 泡沫细胞的形成与氧化性低密度脂蛋白（二） 泡沫细胞的形成与Toll样受体（三） 泡沫细胞的形成与 PPARγ四、脉心康对PPARγ的调控及其意义五、脉心康对ABCA1的调控及其意义六、脉心康对CD36调控及其意义七、脉心康对细胞内钙离子的影响及其意义八、脉心康对TNF-α及IL-1的影响及其意义九、脉心康对细胞内胆固醇及胆固醇醋的影响及其意义十、本研究的意义十一、本研究的创新点与不足参考文献结语附录致谢查新报告论文著作科研课题
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脉心康干预载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化及其巨噬细胞泡沫化的分子机制研究
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