论文摘要
百合是世界四大切花之一,具有花大,色彩丰富,花姿优美的优点,深受人们的喜爱。但是百合存在花粉污染问题,严重影响花朵的观赏质量,还给人们的生活带来了不便。本文使用基因工程技术,以三种百合为材料,通过建立不同外植体的高频再生体系及遗传转化体系,将玉米（Zea mays）花药特异性表达基因ZM401入百合基因组,为获得无花粉百合新材料奠定基础。以3种百合‘P1’、‘P2’、‘X’的无菌苗为材料,通过器官直接发生途径建立高频再生体系。以‘P1’无菌苗叶柄为外植体,在附加3.0mg/LBA和0.2mg/L NAA的MS基础培养基上诱导培养,再生芽分化率达100%,再生芽增殖系数为2.27;以‘P2’无菌苗鳞片为外植体,在附加1.5mg/L BA和0.2mg/L NAA的MS培养基上诱导培养,再生芽分化率达100%,再生芽增殖系数为3.08;以‘X’无菌苗鳞片为外植体,在附加0.2mg/L NAA的MS培养基上诱导培养,再生芽分化率达100%,再生芽增殖系数为1.76。1/2MS+NAA0.5适合三个品种的生根培养。以‘P2’、‘X’无菌苗鳞片为受体材料,潮霉素Hy为选择抗生素,头孢青霉素Cef和羧卞青霉素Cb为抑菌抗生素建立百合遗传转化受体体系。通过试验筛选确定‘P2’鳞片外植体遗传转化选择抗生素为Hy,选择压为40mg/L;‘X’鳞片外植体遗传转化选择抗生素为Hy,选择压为80mg/L。Cb适合作为‘P2’鳞片外植体转化的抑菌抗生素,最适浓度为300mg/L;Cef适合作为‘X’鳞片外植体转化的抑菌抗生素,最适浓度为300mg/L。利用根癌农杆菌介导法将从玉米中克隆到的花药特异性表达基因ZM401转化百合‘P2’和‘X’两个品种。试验结果显示,‘P2’鳞片外植体预培养3d,菌液浓度OD600=0.4～0.6,侵染5min,共培养4d遗传转化率最高,值为10‰;转化试验共获得9株转化ZM401基因的百合株系。‘X’鳞片外植体预培养2d,茵液OD600=0.4～0.6,侵染5min,共培养4d遗传转化率最高,值为6.7‰;转化试验共获得4株转化ZM401基因的百合株系。PCR检测结果表明外源目标基因己整合入两种供试百合植株基因组中。本研究建立了百合‘P1’、‘P2’、‘X’三个品种器官直接发生途径高频再生体系和‘P2’、‘X’两个百合品种鳞片外植体的受体及遗传转化体系,并获得两品种共13株转化ZM401基因的百合株系,为无花粉百合品种的选育提供基础材料。
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相关论文文献
- [1].新铁炮百合遗传转化体系的建立及Zm401基因的导入[J]. 农业生物技术学报 2008(01)