乳腺癌患者外周血hMAM mRNA的定量及其临床意义研究

论文摘要

目的建立SYBR Green I实时定量逆转录PCR（SYBR Green I real-time quantitative RT-PCR,SYBR Green I Q-RT-PCR）体系检测乳腺癌患者外周血及乳腺癌、癌旁乳腺组织人乳腺珠蛋白（human mammaglobin,hMAM）mRNA表达的量,探讨hMAM mRNA作为检测CTCs（circulating tumor cells）标记物的可行性,分析外周血存在CTCs及其量与乳腺癌临床、病理特点之间的联系。方法用SYBR Green I Q-RT-PCR检测hMAM mRNA在乳腺癌细胞株MDA-MB-231和61例乳腺癌患者、33例乳腺良性肿瘤患者、11例健康志愿者的外周血;10例乳腺癌组织、10例对应癌旁乳腺组织中表达的量。结果1.SYBR Green I Q-RT-PCR连续检出乳腺癌细胞株MDA-MB-231极低表达hMAM mRNA,CT值在34.4534.67,变异系数（CV）=0.25%;乳腺良性肿瘤患者及健康志愿者外周血hMAM mRNA均阴性,显示了该方法良好的重复性、灵敏度及特异性。2.乳腺癌患者外周血hMAM mRNA表达阳性率为16.4%（10/61）。其中0期0/3,Ⅰ期0/5,Ⅱ期5/33（15.15%）,Ⅲ期5/20（25.0%）;No 3/31（9.7%）,N1 2/12（6.7%）,N2 4/15（26.7%）,N3 1/3（33.3%）;hMAM mRNA阳性率随其分期进展而增高,但差异无统计学意义（P>0.05）。10例外周血hMAM mRNA阳性患者中,其乳腺癌组织HER2阳性表达者8例,HER2阴性0例,差异有显著性（P=0.028）。外周血hMAM mRNA表达的量在198～6210,（X|-）±S=1119.9±1829.4,与临床、病理特征间比较无统计学差异。3.乳腺癌组织hMAM mRNA阳性率为80%（8/10）。其中Ⅰ期1/1（100%）,其相对量为37800;Ⅱ期6/6（100%）,中位相对量为100.4;Ⅲ期1/3（33.3%）,相对量2.94。其中2例乳腺癌患者不论其癌组织或癌旁乳腺组织hMAM mRNA均阴性;癌组织hMAM mRNA阳性的乳腺癌患者其癌旁乳腺组织亦阳性。乳腺癌组织hMAM mRNA表达的量与其临床、病理特征间比较无统计学意义。结论1.本研究建立SYBR Green I Q-RT-PCR体系可对乳腺癌患者外周血CTCs水平进行定量检测;也可对乳腺癌组织进行hMAM mRNA表达量分析。2.乳腺癌患者外周血有一定比例hMAM mRNA阳性表达,且与其乳腺癌组织HER2表达相关;乳腺癌及癌旁乳腺组织存在较高比例和较高水平hMAM mRNA表达,极少数乳腺癌及其癌旁乳腺组织同时不表达或低表达hMAM mRNA。3.hMAM mRNA可作为检测乳腺癌患者外周血CTCs的指标。4.乳腺癌患者外周血CTCs水平的预后意义需进一步对随访结果分析。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 标本来源
• 2.1.2 主要设备
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 MDA-MB-231 乳腺癌细胞培养
• 2.1.5 主要溶液配制
• 2.1.6 引物设计
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 外周血标本的收集和总 RNA 提取
• 2.2.2 组织标本收集和总RNA 提取
• 2.2.3 MDA-MB-231 乳腺癌细胞总RNA 提取
• 2.2.4 逆转录反应
• 2.2.5 进行SYBR Green I Q-RT-PCR 反应
• 2.2.6 标准品、标准曲线制备
• 2.2.7 SYBR Green I Q-RT-PCR 反应建立
• 2.2.8 组织标本和外周血标本hMAM mRNA 检测
• 2.2.9 PCR 结果分析
• 2.2.10 结果统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 标本总RNA 抽提及逆转录结果
• 3.2 SYBR Green I Q-RT-PCR 重复性实验结果
• 3.3 SYBR Green I Q-RT-PCR 反应特异性实验结果
• 3.4 标准品扩增和标准曲线结果
• 3.5 SYBR Green I Q-RT-PCR 检测乳腺癌组织及对应癌旁乳腺组织hMAM mRNA 结果
• 3.6 SYBR Green I Q-RT-PCR 检测外周血hMAM mRNA 结果
• 3.7 乳腺癌患者外周血 hMAM mRNA 表达与临床病理资料的联系
• 第4章 讨论
• 4.1 CTCs 形成
• 4.2 CTCs 定量方法
• 4.3 hMAM 作为检测乳腺癌CTCs 标记物
• 4.4 hMAM mRNA 在乳腺癌组织表达意义
• 第5章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果