肿瘤抑素T7肽及其衍生物T7-NGR的载体构建及表达

论文摘要

肿瘤的生长和转移都依赖于新生血管的生成，如果能抑制肿瘤新生血管的生成，肿瘤细胞将发生凋亡或坏死。近来发现了一些来源于组织或体液的血管生成抑制物，它们是大分子蛋白的生物活性片断。肿瘤抑素（tumstatin）是源于人基膜ColⅣ的肿瘤新生血管生成的抑制因子，分子量为28kD，由2411个氮基酸组成，包括ColⅣα3的NC1活性区域的232个氨基酸和中间3股螺旋区C-端的12个氨基酸。近来研究表明，Tumstatin有两个不同的活性区，它主要有两方面活性：（1）抑制新生血管的生成，从而抑制肿瘤的生长、浸润和转移；（2）直接抑制肿瘤细胞增殖。这些作用主要是通过Tumstatin和肿瘤新生血管上特异高表达的整合素αvβ3结合来实现的。其抗血管生成活性被逐步定位于肿瘤抑素第74-98位残基的25个氨基酸，将其命名为T7肽。由于其分子量小，穿透性强，具有较低的免疫原性和较强的稳定性，有望成为肿瘤特异性诊断标记物及细胞靶向治疗的活性物质。NGR是从噬菌体展示文库中筛选出的一种含13个氨基酸（CNGRCVSGCAGRC）的寡肽，它通过与肿瘤血管表面高表达的氨肽酶N（CD13）分子特异地结合，实现与肿瘤新生血管的特异性结合。利用NGR肽高亲和力结合特性，己经将病毒载体、放射性示踪剂等靶向性地运输到肿瘤组织的新生血管处。本文利用基因重组和表达技术分别构建T7肽和T7-NGR的克隆载体和表达载体，获得了表达产物-T7肽和将NGR融合在T7肽的C末端的T7肽衍生物T7-NGR，为T7肽和T7-NGR肽的抑制肿瘤活性及T7-NGR对肿瘤新生血管的导向作用（如肿瘤放射受体显像）等活性实验奠定基础。

论文目录

• 技术路线
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 实验材料
• 1.主要实验仪器
• 2.主要实验试剂
• 3.引物
• 7-NGR序列'>4.T₇-NGR序列
• 5.菌株、细胞株及质粒
• 6.主要溶液系统及配制
• 实验方法
• 1.人Tumstatin基因的克隆和表达载体的构建
• 7肽基因克隆载体的构建'>2.T₇肽基因克隆载体的构建
• 7-NGR基因合成及克隆载体构建'>3.T₇-NGR基因合成及克隆载体构建
• 7、T₇-NGR表达载体的构建'>4.T₇、T₇-NGR表达载体的构建
• 7、T₇-NGR表达及Western-Blot鉴定'>5.T₇、T₇-NGR表达及Western-Blot鉴定
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录一、综述 肿瘤抑素活性肽段及其衍生物研究新进展
• 附录二、常见英文缩写
• 致谢
• 个人情况简介