儿童孤独症的高危因素及早期特征、血浆谷氨酸和γ-氨基丁酸浓度、Reelin基因多态性的研究

论文摘要

目的（1）研究儿童孤独症发病的高危因素及孤独症儿童的早期发育特征。（2）研究血浆谷氨酸和丫-氨基丁酸浓度变化与儿童孤独症的关系,及其在儿童孤独症易发癫痫病理机制中的作用。（3）通过对Reelin基因上四个单核苷酸多态（SNP）位点rs736707、rs2229864、rs362691、rs2073559的检测,探讨Reelin基因多态性与儿童孤独症的关系。方法（1）共入组儿童孤独症核心家系278例及正常对照儿童核心家系200例,调查一般人口学资料、母孕期情况、围产期情况、发育性标志出现时间、养育情况、既往史、家族史及体格检查情况;对于孤独症儿童,尚需调查早期症状表现、评定儿童孤独症评定量表（CARS）及孤独症行为检查量表（ABC）。（2）27例伴癫痫的孤独症患者作为观察组,30例不伴癫痫的孤独症患者为另一观察组,36例正常儿童作为对照组。采用高效液相色谱法测定三组血浆谷氨酸和γ-氨基丁酸浓度,进行组间比较。（3）在中国汉族孤独症核心家系（孤独症患者234人,父母399人）及正常对照人群（286人）中,检测Reelin基因上四个单核苷酸多态位点rs736707、rs2229864、rs362691、rs2073559,采用TaqMan—PCR的方法确定样本各位点的基因型,进行以核心家系为基础的传递不平衡检验及病例对照的关联研究。（4）采用DNA测序和序列分析的方法,验证TaqMan-PCR等位基因鉴别分析技术的准确性。（5）使用GENEHUNTER（version 2.1）软件对孤独症核心家系进行传递不平衡分析,使用SAS软件包构建单倍体模型,以x2检验比较组间差异。统计分析采用SPSS14.0软件包,根据资料特征分别进行独立样本t检验、x2检验、方差分析、Logistic回归分析以及计算暴露因素的优势比（OR值）。结果（1）儿童孤独症先证者中男性233人,女性45人,男女比例为5.18:1;患者起病年龄为22.36±8.29月。家长感觉到孩子异常最早是在10个月时,最晚在48个月。（2）与正常儿童相比,孤独症患者的多项围产期和母孕期高危因素差异具有显著性。Logistic回归发现:母亲受教育年限（P=0.009）、父亲生育年龄（P=0.001）、家庭负担（P=-0.001）、抚育者（P=0.001）、妊娠反应（P=0.025）、孕期服药史（P=0.014）、分娩方式（P=-0.045）、养育方式（P＜0.001）、主要教导者（P＜0.001）、阳性家族史（P=0.002）进入回归方程。（3）计算回归方程中有临床意义的6项指标的组间优势比（OR值）,从强到弱依次为父亲生育年龄＞30岁（OR=6.715）、家族史阳性（OR=5.798）、孕期服用药物（OR=4.653）、非自然分娩（OR=4.147）、母亲受教育年限＞11年（OR=1.373）、妊娠反应中/重度（OR=1.044）。（4）与对照组儿童相比,孤独症儿童的各项发育性标志出现时间、孤独症早期表现总分、头围等指标,差异具有统计学意义（P＜0.001）。（5）不伴癫痫的孤独症组（A组）血浆谷氨酸浓度为653.95±545.87pmol/L,伴有癫痫的孤独症组（B组）血浆谷氨酸浓度为1608.81±1478.22pmol/L,正常对照儿童（C组）血浆谷氨酸浓度为653.70±589.86pmol/L。A组与B组相比,差异具有显著性（P＜0.05）;B组与C组相比,差异具有显著性（P＜0.05）;A组与C组相比,无显著性差异（P＞0.05）。A组血浆γ-氨基丁酸浓度为71.46±65.98pmol/L,B组为111.19±85.27pmol/L,C组为70.13±51.36pmol/L。A组与B组相比,差异具有显著性（P＜0.05）;B组与C组相比,差异具有显著性（P＜0.05）;A组与C组相比,无显著性差异（P＞0.05）。（6）孤独症核心家系单位点SNP传递不平衡分析,四个位点均无显著性差异（P＞0.05）;四个位点组成的单倍体中GTCC 5条全部未传递,未传递存在显著性差异,其余各单倍体未发现不平衡传递。对照组样本在四个SNPs多态位点上全部符合H-W平衡。病例对照关联研究中,孤独症组与对照组四个SNPs多态位点基因型及等位基因频率比较均未发现显著性差异（P＞0.05）。孤独症组与对照组单倍体分型比较中,rs362691-rs2073559相邻两位点的CC、CT、GC三种单倍体,每一单倍体频率在两组之间比较,差异均无显著性（P＞0.05）;而GT单倍体频率在两组之间差异具有显著性（x2=5.805,P=0.020）。两组单倍体频率构成具有显著性差异（x2=9.682,P=0.021）。其余相邻两位点、三位点以及四个位点组合的每一单倍体频率、以及单倍体频率构成均无显著性差异（P＞0.05）。结论（1）儿童孤独症在母孕期、围产期高危因素明显增多,前三位的高危因素分别是父亲生育年龄大于30岁、家族史阳性、孕期服用药物史。（2）孤独症儿童整体发育落后于正常对照儿童,而且在发育过程中具有某些特征性的早期表现,有望被早期识别。（3）血浆谷氨酸/γ-氨基丁酸浓度异常在孤独症儿童中并不具有普遍性,仅在伴有癫痫的孤独症儿童中有异常升高。谷氨酸/γ-氨基丁酸系统功能异常可能是孤独症易发癫痫的病理机制之一。（4）以孤独症核心家系为基础的传递不平衡检验未发现Reelin等位基因的优势传递。病例对照关联研究发现仅rs362691-rs2073559的GT单倍体频率在两组之间存在显著性差异,提示Reelin基因与孤独症无关联。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 1.孤独症概述
• 2.孤独症的研究现状
• 3.孤独症的谷氨酸/γ—氨基丁酸功能紊乱学说
• 4.Reelin基因与孤独症
• 第二章 儿童孤独症的高危因素和临床特点分析
• 1 对象与方法
• 1.1 研究对象
• 1.2 研究方法
• 2 结果
• 2.1 人口学特征
• 2.2 儿童孤独症的高危因素比较
• 2.3 儿童孤独症的临床特点
• 3 讨论
• 第三章 儿童孤独症血中谷氨酸和γ-氨基丁酸浓度测定
• 1 对象与方法
• 1.1 研究对象
• 1.2 研究方法
• 2 结果
• 2.1 一般资料
• 2.2 血中谷氨酸浓度、γ-氨基丁酸浓度测定
• 3 讨论
• 第四章 Reelin基因多态性与儿童孤独症关联分析
• 1 对象与方法
• 1.1 研究对象及标本的采集
• 1.2 材料和方法
• 1.2.1 试验材料
• 1.2.2 人基因组DNA样本的抽提
• 1.2.3 DNA浓度分析和调整
• 1.2.4 用TaqMan-PCR方法检测基因型
• 1.2.5 DNA测序和序列分析
• 1.3 统计分析
• 2 结果
• 2.1 四个位点SNPs分型及测序结果图
• 2.2 对照组样本进行H-W平衡分析
• 2.3 核心家系的传递不平衡分析
• 2.4 孤独症组与对照组的基因型和等位基因频率的比较
• 2.5 孤独症组与对照组单倍体比较
• 3 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述 儿童孤独症遗传学研究进展
• 参考文献
• 致谢
• 在读期间发表的学术论文、参与科研及获奖情况