获得性纯红细胞再生障碍性贫血γδT细胞克隆性分析

获得性纯红细胞再生障碍性贫血γδT细胞克隆性分析

论文摘要

目的:通过对获得性纯红细胞再生障碍性贫血(PRCA)患者γδT细胞的T细胞受体(TCR)γ基因重排分析,探讨在获得性PRCA的患者体内是否存在克隆性增生的γδT细胞。 对象及方法:采用针对TCR-γ链基因的特异性引物和一步法RT-PCR扩增14例PRCA患者及10例正常人外周血γδT细胞的TCR-γ基因的CDR3区,并利用琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳及Band leader3.0凝胶图像分析检测CDR3区长度的变化以判断γδT细胞的克隆性,部分呈克隆性表型的病例通过直接测序证实。 结果:1、2%琼脂糖电泳结果显示:经RT-PCR,14例PRCA患者及10例正常对照均扩增获得230bp(Ⅵ亚家族)或240bp(Ⅶ亚家族)左右的阳性条带。2、8%聚丙烯酰胺凝胶电泳及凝胶图像分析显示:14例PRCA患者中有4例PRCA患者(病例1和病例3的Ⅵ亚家族,病例4和病例8的Ⅶ亚家族)出现较浓集的单个条带,凝胶图像分析显示为一基底较窄的锐利高峰与一些矮峰,代表寡克隆;其余的10例PRCA的患者和10例正常对照均表现为模糊宽带或在模糊宽带的背景上出现多条较浓集的条带,凝胶图像分析显示灰

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