系统性红斑狼疮相关T细胞克隆的实验研究

论文摘要

目的:通过研究系统性红斑狼疮患者T细胞受体可变区β链互补决定区3(TCRVβCDR3)的表达,寻找与病证相关的T细胞克隆。方法:收集系统性红斑狼疮患者12例,根据痰瘀辨证标准进行分类,设立正常对照6例和类风湿关节炎对照5例。每例抽取5ml外周血,运用RT—PCR技术,扩增TCRVβ25个家族的CDR3区,通过长泳道测序胶电泳观察TCRVβCDR3谱型图,分析T细胞表达特征;对发生优势克隆增生的异常条带进行二次PCR,测序,进行比对分析。结果:1.正常人外周血TCRβ链的25个V基因家族均有表达,条带的强弱呈现正态的高斯(Gaussian)分布。2.系统性红斑狼疮患者与正常人群相比,发生异常变化的TCRVβ家族明显增多,具有统计学意义(P＜0.05);而类风湿性关节炎患者与正常组相比,发生异常的家族虽较之有一定增多,但无统计学意义。3.痰瘀兼夹型系统性红斑狼疮组比正常人群异常TCRVβ家族数目明显增多(P＜0.01),与非痰瘀兼夹型SLE组相比有统计学意义(P＜0.01);而非痰瘀兼夹型系统性红斑狼疮患者其异常家族虽较之正常组增多,但与正常人群相比无意义。兼夹证型较之单一证型异常家族数目明显增多。4.编号为SLE5、SLE7、RA1的患者Vβ25CDR3区完全一致(CASSLRGSTEAFF),三者辨证均属于血瘀证;编号为SLE1和RA1的患者Vβ12CDR3区完全一致(CAISELREGDMSSGNTIYF),SLE1为痰瘀兼夹证,RA1为血瘀证;编号为SLE12、RA3的患者Vβ4CDR3区完全一致(CSVGGLAGETQYF),SLE12为痰瘀兼夹证,RA3为血瘀证;编号SLE9的患者与造血干细胞移植后GVHD和CMV相关的异常扩增的T淋巴细胞CDR3序列完全相同(CASSPGDEQFF),属于Vβ11家族,SLE9为非痰非瘀型缓解期患者。结论1.TCRVβ谱系可作为系统性红斑狼疮一个微观辨证参考指标。2.不同自身免疫病有相同的序列,推测LREGDMS、LRGS、GGLAG、PGD是与自身免疫病发病相关的模体。3.同一证型可能存在着有相同序列的T细胞。CASSLRGSTEAFF、CAISELREGDMSSGNTIYF、CSVGGLAGETQYF可能与血瘀证具有一定的相关性,模体为LREGDMS、LRGS、GGLAG的T细胞可能是在自身免疫病中,与血瘀证发生相关的T细胞,其活化所介导的自身免疫反应可能使患者有表现为血瘀证的倾向。

论文目录

• 目录
• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 引言
• 实验研究
• 1.研究对象
• 1.1 诊断及辨证标准
• 1.2 一般情况
• 2.实验仪器与试剂
• 2.1 主要试验仪器
• 2.2 主要试剂
• 2.3 试剂配制
• 2.4 引物处理
• 3.实验方法
• 3.1 外周血单个核细胞分离
• 3.2 提取RNA
• 3.3 逆转录反应
• 3.4 聚合酶链反应
• 3.5 琼脂糖电泳检测PCR产物
• 3.6 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 3.7 银染方法
• 3.8 测序
• 3.9 数据分析
• 3.10 统计学分析
• 结果
• 1.TCRVβCDR3基因谱型图的观察
• 2.不同TCRVβ克隆异常家族比较
• 3.异常条带的测序结果
• 3.1 异常增生T细胞克隆测序结果
• 3.2 T淋巴细胞CDR3区比较
• 讨论
• 1.西医学对系统性红斑狼疮的认识
• 2.中医学对系统性红斑狼疮的认识
• 3.瘀血痰湿在系统性红斑狼疮病因与病机演变中的作用
• 4.实验方法的探讨
• 4.1 T细胞受体β链可变区互补决定区3检测方法的探讨
• 4.2 变性聚丙烯酰胺凝胶银染法的探讨
• 5.对外周血TCR VβCDR3表达意义的探讨
• 6.问题与展望
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 附图
• 20种氨基酸的密码子表
• 氨基酸中英文对照表
• 综述
• 参考文献
• 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果