内皮抑素基因转染子宫内膜位症大鼠模型的基因与蛋白表达量分析

论文摘要

目的：应用阳离子脂质体介导的内皮抑素（ES）重组质粒局部注射法将ES基因转染至子宫内膜异位症（EMs）大鼠模型，判断转染是否成功，以了解ES转基因技术应用于EMs治疗的可能，并为后期的疗效观察打下基础。方法：85只14周龄健康雌性未孕Lewis大鼠采用自体子宫内膜移植法构建EMs模型，手术4周后（转染前）第二次开腹，通过肉眼大体观察判断建模成功与否。选择建模成功的64只大鼠作为实验研究对象，随机分为ES转染组（Ⅰ组）24只、载体对照组（Ⅱ组）20只和阴性对照组（Ⅲ组）20只。ES转染组大鼠用10μl微量注射器一次性异位病灶内注射lipofectamine-endo-pBud复合物2μl进行ES基因转染，载体对照组大鼠同法注射载体脂质体lipofectamine-pBud复合物2μl，阴性对照组同法注射PBS2μl进行对照。2周后（转染后）第三次开腹，每组大鼠各随机均分为两小组，即Ⅰ组分为Ⅰa组（12只）和Ⅰb组（12只），Ⅱ组分为Ⅱa组（10只）和Ⅱb组（10只），Ⅲ组分为Ⅲa组（10只）和Ⅲb组（10只）。取Ⅰa、Ⅱa与Ⅲa 3小组异位病灶组织通过实时荧光定量PCR法检测ES基因的相对表达量，用Western-blot对ES蛋白的相对表达量进行测定，同时Ⅰa组的异位病灶组织用Western-blot对ES-HA融合蛋白进行测定，均用来判断转染成功与否，用另外3小组Ⅰb、Ⅱb与Ⅲb组的异位病灶组织固定、包埋、切片后通过HE染色病理组织学检查进一步确认建模的成功。结果：1．自体子宫内膜移植法构建Lewis大鼠子宫内膜异位症模型，术后4周85只大鼠中有64只见移植物体积增大，内部有液体积聚，表面有血管形成，呈隆起透亮的小囊状，质软，病理组织学检查见囊内壁有子宫内膜腺体组织及间质细胞生长，视为建模成功；成功率为75.29％；11只为异位病灶不生长萎缩变小，8只为炎性坏死囊肿，呈浑浊黄白色结节状，切开囊肿成黄色膏脂样物，2只死亡。2．采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导的重组质粒endo-pBud病灶内直接注射的方法进行大鼠内皮抑素基因转染，注射相应试剂后2周实时荧光定量PCR法检测到转染组异位病灶组织中ES基因的表达高于载体对照组和阴性对照组（P＜0.05），而载体对照组与阴性对照组之间比较无统计学差异（P＞0.05）；Western-blot的结果示ES转染组异位病灶组织有ES-HA融合蛋白表达，且ES蛋白的相对表达量ES转染组显著高于载体对照组和阴性对照组（P＜0.01），而载体对照组与阴性对照组之间比较无统计学差异（P＞0.05）。结论：1．自体子宫内膜移植法建立Lewis大鼠子宫内膜异位症模型具有可行性和可重复性，是较理想的动物模型。2．阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导的重组质粒endo-pBud病灶内直接注射法可以成功实现ES在子宫内膜异位症大鼠异位内膜中的表达。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 缩略词一览表
• 第一章 前言
• 第二章 对象和方法
• 2.1 研究对象
• 2.2 主要试剂
• 2.3 实验仪器
• 2.4 实验步骤
• 2.5 统计方法
• 第三章 结果
• 3.1 子宫内膜异位症大鼠模型建立
• 3.2 实时荧光定量 PCR的结果
• 3.3 Western-blot的结果
• 第四章 附图
• 第五章 讨论
• 5.1 子宫内膜异症大鼠模型的建立
• 5.2 ES转染用于EMs大鼠
• 5.3 展望
• 第六章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 在读期间科研工作和发表论文及获奖情况