湖南地方黄牛及其杂交牛MC1R、H-FABP基因多态性研究

论文摘要

研究的目的是通过运用现代分子生物学实验方法,研究分析湖南本地黄牛及其杂交牛MC1R（黑色素皮质激素受体1）和H-FABP（心脏脂肪酸结合蛋白）基因的多态性,从而为湖南省本地牛的杂交育种和品种改良提供新思路。实验中我们选取湖南省最具代表性的湘西黄牛和“湘中黑牛”为实验动物。其中,湘西黄牛个体186头,通过PCR-RFLP和DNA克隆测序技术来研究分析MC1R基因编码区部分序列的遗传变异,分析了湘西黄牛黑毛色和红毛色产生的分子机制,为湘西黄牛产业化发展和保种选育提供依据。“湘中黑牛”个体140头,通过PCR-SSCP和DNA测序技术来研究分析H-FABP基因5′端调控区的多态性对大理石花纹等级和肌内脂肪含量的影响,并以此为它们作为相应肉品质性状的候选基因提供理论依据。通过研究发现:湘西黄牛MC1R基因有三个等位基因:ED、E+、e。基因存在T296C的置换突变,结果导致99位亮氨酸到脯氨酸的突变,在表型上主要表现黑色毛色。MC1R基因在310 G缺失突变产生e等位基因,结果导致或强或弱的红色毛色。“湘中黑牛”H-FABP基因5′端调控区存在多态性,有三种基因型,分别记为:AA,AB,BB。H-FABP基因5′-调控区第136位发生了T碱基的插入,142位点发生了G→A转换。AA基因型为A142A纯合子,BB基因型为G142G纯合子。利用统计分析模型,以性状表型值的最小二乘均值来分析H-FABP基因型与表型差异显著性。结果表明:肌内脂肪含量在AA与AB、BB基因型之间差异极显著（P＜0.01）,AB、BB基因型之间差异不显著（P＞0.05）。大理石花纹等级在AA、AB、BB基因型之间差异均不显著,由此可知,H-FABP基因可以做为肌内脂肪含量的侯选基因。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章:湘西黄牛毛色控制基因MClR多态性研究
• 一 文献综述
• 1 湘西黄牛品种简介
• 2 毛色遗传的研究现状
• 2.1 毛色遗传研究的意义
• 2.2 常见的牛毛色表型
• 2.3 毛色形成的机理
• 2.4 影响牛毛色表型的主要基因
• 3 常见的分子标记方法
• 3.1 单核苷酸多态性
• 3.2 限制性片断长度多态性
• 3.3 单链构象多态性
• 4 研究目的意义及主要内容
• 二 材料与方法
• 1 实验材料与器材
• 2 试验方法与步骤
• 2.1 牛血液基因组DNA的提取与检测
• 2.2 PCR扩增目的基因
• 2.3 PCR产物纯化回收
• 2.4 目的片段的酶切实验
• 2.5 PCR-RFLP检测
• 2.6 PCR纯化回收产物连接PGEM-T easy载体
• 2.7 感受态细胞的制备
• 2.8 转化大肠杆菌JM109菌株
• 2.9 蓝白斑筛选
• 2.10 质粒小量提取
• 2.11 重组质粒酶切鉴定
• 2.12 测序与序列分析
• 三 结果与分析
• 1 牛组织和血液样品DNA提取结果
• 2 PCR扩增结果
• 3 PCR扩增产物纯化回收
• 4 RFLP检测结果
• 5 阳性克隆鉴定
• 6 序列测定结果
• 四 讨论与结论
• 1 样品DNA的提取
• 2 PCR扩增
• 3 PCR产物纯化回收实验
• 4 限制性内切酶实验
• 5 PCR-RFLP分析
• 6 克隆测序讨论
• 7 结论
• 第二章:湘中黑牛H-FABP基因与牛肉大理石花纹等级肌内脂肪含量的相关性研究
• 一 文献综述
• 1 研究背景与科学意义
• 2 湘中黑牛简介
• 3 肉牛生产的现状
• 4 肉类质量的研究进展
• 5 肌内脂肪含量
• 6 大理石花纹
• 7 H-FABP基因的研究进展
• 8 研究目的意义及主要内容
• 二 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 2.1 牛肉肌内脂肪含量的测定
• 2.2 牛肉大理石纹的评定
• 2.3 牛血液DNA的提取和检测
• 2.4 PCR反应
• 2.5 SSCP检测
• 2.6 PCR产物进行纯化回收
• 2.7 克隆测序（PCR产物直接测定序列）
• 3 统计分析
• 三 结果与分析
• 1 基因组DNA的提取结果
• 2 PCR扩增结果
• 3 牛H-FABP基因的PCR-SSCP检测
• 4 PCR产物纯化回收结果
• 5 测序结果与分析
• 6 统计分析
• 四 讨论与结论
• 1 PCR-SSCP分析
• 2 PCR产物直接测序的讨论
• 3 哈代平衡以及PIC检验
• 4 H-FABP基因与牛肉大理石花纹等级、肌内脂肪含量的关系
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介