论文摘要
第一部分：脱氧鬼臼毒素杀虫活性及时几种酶系的影响采用药膜法、小叶碟添加法，分别研究了脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊Periplaneta americana初孵若虫、3龄菜青虫Pieris rapae L.的生物活性；采用酶促反应，离体和在体测定了脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊成虫、3龄菜青虫体内乙酰胆碱酯酶（AChE）和腺苷三磷酸酶（ATPase）活性的影响。脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊初孵若虫的杀虫活性表现出浓度、时间依赖性，24、48、72和96 h的LC50分别为26.26＞4.68＞1.51＞0.62μg／cm2；对3龄菜青虫48、72和96 h的LC50分别为151.87＞39.99＞10.60 mg／L；脱氧鬼臼毒素在1～625μmol／L范围内对AChE活性无影响；对美洲大蠊Na+-K+-ATPase离体活性有明显抑制作用，并存在浓度-效应关系，IC50为44.9μmol／L；对3龄菜青虫Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase的在体活性和美洲大蠊Ca2+-Mg2+-ATPase离体活性，表现出低剂量激活，高剂量抑制的现象。试验结果提示，脱氧鬼臼毒素对美洲大蠊初孵若虫、3龄菜青虫具有较强的毒杀活性；美洲大蠊、菜青虫AChE不是脱氧鬼臼毒素靶标；ATPase可能是脱氧鬼臼毒素的重要靶标之一。第二部分：脱氧鬼臼毒素对斑马鱼毒性作用及机制的研究采用静态鱼类急性毒性试验法测定了脱氧鬼臼毒素和鬼臼毒素对斑马鱼的毒性，以氰戊菊酯作对照；参照脱氧鬼臼毒素96h LC50设定4个浓度梯度处理斑马鱼，48h后测定斑马鱼肌肉组织ATPase、CAT和SOD的活性。脱氧鬼臼毒素、鬼臼毒素和氰戊菊酯对斑马鱼的96 h LC50值分别为3.49、3.70和0.00775 mg／L，安全浓度分别为0.36、1.61和0.000803 mg／L。脱氧鬼臼毒素在0.5～4 mg／L浓度范围对总ATP、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase的作用趋势基本一致，表现为1～2 mg／L激活，高浓度抑制作用。4 mg／L能抑制总ATPase、Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase活性，抑制率分别为24.4％、12.3％和33.8％。脱氧鬼臼毒素在0.5 mg／L时，能抑制SOD的活性，而对CAT活性没有作用。1、2 mg／L组对两种酶活性均表现出激活作用，4 mg／L时，SOD和CAT均被抑制，抑制率分别为34.1％和31.9％。试验结果提示，脱氧鬼臼毒素和鬼臼毒素的毒性为中毒；斑马鱼的ATPase、CAT和SOD可能是脱氧鬼臼毒素的作用靶标之一。第三部分：脱氧鬼臼毒素对大鼠背根神经节神经元钙稳态的影响采用激光共聚焦显微镜、酶促反应技术测定脱氧鬼臼毒素对大鼠背根神经节神经元胞内钙离子浓度、AChE和ATPase活性的影响。外液有钙时，脱氧鬼臼毒素能诱导[Ca2+]i升高，并有明显的浓度-效应关系，EC50为22.2μmol／L。外液无钙时，脱氧鬼臼毒素也能快速诱导[Ca2+]i升高，但没有浓度-效应关系。在1～625μmol／L范围内对大鼠DRG神经元AChE活性没有影响。脱氧鬼臼毒素对Na+-K+-ATPase和Ca2+-ATPase均为抑制作用，无剂量反应关系。试验结果提示：DRG神经元AChE不是脱氧鬼臼毒素作用靶标；脱氧鬼臼毒素诱导DRG神经元[Ca2+]i升高；[Ca2+]i的升高由外钙内流、胞内钙库Ca2+释放及ATPase活性受抑制共同引起。
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