应用胶原—壳聚糖和细菌纤维素为支架构建角膜基质的研究

论文摘要

人类目前对于角膜病致盲的治疗、囿于人自身材料的珍贵和不可再生性,国内外研究前沿在于寻找等同于角膜的替代物,集中在组织工程化的角膜再生,对于角膜细胞在体外微环境中生长特性,包括更适合角膜细胞生理状态的生物支架等研究,处于广泛的探讨中。本文以兔和人角膜基质细胞为种子细胞,应用体外细胞培养技术传代扩增,采用胶原-壳聚糖共混膜和细菌纤维素为支架分别进行复合构造,应用免疫组织化学染色、激光扫描共聚焦显微镜免疫荧光检测鉴定,构建后的组织膜片同种异体角膜移植,应用角膜共焦显微镜和前节OCT对移植膜活体观察,组织学检测确定细胞生长及复合物的生物相容性,MTT和实时定量PCR技术对体外培养角膜基质细胞生物特性检测、统计学方法对实验结果进行分析。实验结果如下:1、以胶原-壳聚糖为支架进行兔和人角膜基质复合膜构建成功。2、以细菌纤维素（生物纳米材料）为支架进行了兔和人角膜基质复合膜构建成功。3、角膜基质细胞-胶原-壳聚糖复合膜片和角膜基质细胞-细菌纤维素复合膜片进行同种异体移植后生物相容性良好。4、角膜共焦显微镜和前节OCT观察到活体角膜基质复合膜片构建后的生物降解和对正常组织的影响。5、PDTC抑制体外培养的炎性刺激后的角膜基质增生,对正常角膜基质细胞的增殖无明显作用。本实验提出两种新型生物支架,可以作为角膜基质再造更加理想的生物材料,在人类角膜组织工程化研究渐进梯次上,拓展了新的研究前景。本课题研究目前在国内外未见报道。

论文目录

• 提要
• 英文缩略词表
• 前言
• 第一部分 文献综述
• 一、角膜组织再生的细胞源
• 二、角膜组织再生的生物支架
• 三、角膜组织再生研究中存在的问题
• 四、新型纳米生物材料细菌纤维素
• 五、细胞因子对于角膜细胞的作用
• 第二部分 实验研究
• 第一章 角膜基质细胞与胶原-壳聚糖构建
• 1. 材料与方法
• 2. 实验结果
• 3. 讨论
• 4. 附图
• 第二章 角膜基质细胞与细菌纤维素构建
• 1. 材料与方法
• 2. 实验结果
• 3. 讨论
• 4. 附图
• 第三章 PDTC 对角膜基质细胞增殖的影响
• 1. 材料与方法
• 2. 实验结果
• 3. 讨论
• 4. 附图
• 结论
• 参考文献
• 攻读博士论文学位期间已发表的的文章
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢