石莼多糖的提取、纯化及生物活性初步研究

论文摘要

石莼（Ulva lactuca）是一种大型经济海藻,含有丰富营养物质如蛋白质、多糖、维生素、无机元素等,对促进机体的正常生长发育、保证机体健康有着重大的作用。本文对石莼进行了多糖提取工艺的优化研究,并通过对石莼粗多糖进行分离、纯化获得了1个纯化样品,对其进行了理化性质和较为深入的生物活性研究。本论文采用正交试验,分别研究了热水浸提法、超声波法提取石莼粗多糖的最优工艺。根据极差分析和实验室实际具体情况确定了热水浸提法的最佳工艺为浸提时间4小时、加水量为50倍、浸提温度90℃;超声波提取法的最佳工艺为超声功率800W、加水量为50倍、提取时间20min。本文采用Sevag法除蛋白,以多糖损失率和脱蛋白率为衡量指标来研究最佳的脱蛋白工艺,得出最佳的脱蛋白次数为3次。采用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱和Sephadex G-200凝胶柱依次对热水所提多糖（ULS）和超声提取多糖（ULC）进行分离纯化,通过比较以验证超声提取方法的可行性。结果表明:与热水浸提法相比,超声提取多糖的提取率高,效率高,且提取更加充分,所提多糖与热水浸提法无差别。样品ULC和ULS通过纯化得到ULCF1和ULSF11。对ULCF1和ULSF11通过离子色谱法分析其单糖组成,凝胶色谱法测定其相对分子量,红外光谱测定多糖结构,并对多糖的理化性质进行了初步测定。采用细胞病变（CPE）抑制法和MTT比色法,研究所提多糖的对Hela细胞的毒性及抗CVB3病毒的活性。结果显示,所有样品均表现出较强的抗病毒活性,且对Hela细胞的毒副作用较小。对石莼多糖进行体外抗氧化活性研究:通过对石莼多糖还原能力的测定分析了它们的抗氧化活性;用邻二氮菲-金属铁离子-H2O2体系测定石莼多糖清除·OH的能力;用邻苯三酚自氧化法测定石莼多糖对的清除作用;分析了石莼多糖对DPPH的清除作用。除ULCF2外,其他样品均有体外抗氧化活性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第1章 前言
• 1.1 石莼的研究概述
• 1.1.1 石莼简介
• 1.1.2 石莼的研究现状
• 1.2 多糖研究概述
• 1.2.1 多糖的提取、分离纯化
• 1.2.2 多糖的测定方法
• 1.2.3 多糖的生物活性研究
• 1.3 海藻生物多糖抗病毒作用研究概述
• 1.3.1 抗病毒海藻生物多糖药物的应用及开发
• 1.3.2 多糖抗病毒作用的构效关系
• 1.4 抗氧化药物研究概述
• 1.5 本研究的意义、内容和目标
• 1.5.1 本课题的研究意义
• 1.5.2 本文的研究内容及目标
• 第2章 石莼多糖提取工艺的研究
• 2.1 实验材料、试剂及仪器
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 石莼多糖的提取工艺流程
• 2.2.2 多糖含量测定方法的建立
• 2.2.3 多糖中硫酸基含量的测定
• 2.2.4 石莼多糖热水提取方法的研究
• 2.2.5 石莼多糖超声提取方法的研究
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 多糖含量测定的标准曲线
• 2.3.2 硫酸基含量测定的标准曲线
• 2.3.3 热水提取石莼多糖方法的研究
• 2.3.4 超声波法提取石莼多糖方法的研究
• 2.3.5 热水浸提法和超声提取方法的比较
• 2.4 讨论
• 第3章 石莼多糖的分离、纯化及结构分析
• 3.1 主要仪器与主要试剂
• 3.1.1 主要仪器
• 3.1.2 主要试剂
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 粗多糖分离纯化的操作流程
• 3.2.2 石莼多糖中杂质的分离
• 3.2.3 石莼多糖的纯化
• 3.2.4 石莼多糖的紫外光谱分析
• 3.2.5 石莼多糖的单糖组成分析
• 3.2.6 石莼多糖相对分子量的测定
• 3.2.7 石莼多糖的结构分析
• 3.2.8 石莼多糖理化性质分析
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 石莼粗多糖杂质的分离
• 3.3.2 石莼粗多糖的纯化
• 3.3.3 石莼多糖的紫外吸收光谱图
• 3.3.4 石莼多糖的单糖组成分析
• 3.3.5 相对分子量测定结果
• 3.3.6 石莼多糖的结构分析
• 3.3.7 石莼多糖理化性质分析
• 3.4 讨论
• 3病毒的活性研究'>第4章 石莼多糖抗CVB₃病毒的活性研究
• 4.1 实验样品、主要试剂及主要仪器
• 4.1.1 实验样品
• 4.1.2 主要试剂
• 4.1.3 主要仪器
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 主要试剂的配制
• 4.2.2 细胞的冻存、复苏和培养
• 4.2.3 病毒的繁殖和毒力测定
• 4.2.4 石莼多糖样品对Hela细胞的细胞毒性测定
• 3所致CPE的抑制作用'>4.2.5 石莼多糖对CVB₃所致CPE的抑制作用
• 4.2.6 统计学处理
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 病毒毒力
• 4.3.2 石莼多糖及病毒唑对Hela细胞的细胞毒性
• 3所致CPE的抑制作用'>4.3.3 石莼多糖对病毒CVB₃所致CPE的抑制作用
• 4.4 讨论
• 第5章 石莼多糖体外抗氧化活性的初步研究
• 5.1 实验样品、主要试剂及主要仪器
• 5.1.1 实验样品
• 5.1.2 主要试剂
• 5.1.3 主要仪器
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 石莼多糖还原能力测定
• 5.2.2 石莼多糖对·OH的清除作用
• 2^·-的清除作用'>5.2.3 石莼多糖对O₂^·-的清除作用
• 5.2.4 石莼多糖对DPPH自由基的清除作用
• 5.3 实验结果
• 5.3.1 石莼多糖还原能力测定结果
• 5.3.2 石莼多糖对·OH的清除作用
• 2^·-的清除作用'>5.3.3 石莼多糖对O₂^·-的清除作用
• 5.3.4 石莼多糖对DPPH自由基的清除作用
• 5.4 讨论
• 第6章 结论与展望
• 6.1 结论
• 6.2 创新
• 6.3 不足及展望
• 参考文献
• 附录 硕士研究生期间发表的论文
• 致谢