论文摘要
[目的]建立脊髓损伤的动物模型，研究大剂量甲基强的松龙、咯利普兰对SD大鼠脊髓神经丝蛋白(NF)、突触素(SYP)表达变化和运动功能的影响，探讨大剂量泼尼松、咯利普兰治疗脊髓损伤的可行性。[方法]SD成年雌性大鼠84只，体重220±20克，随机分成14组：即假损伤组；脊髓挫伤组(SCI组)，再分为：1天组、3天组、7天组、14天组、21天组、28天组；大剂量甲基强的松龙治疗组(MP组)，再分为：1天组、3天组、7天组、14天组、21天组、28天组；咯利普兰治疗组(ROL组)。用改良的Allen装置造成T12脊髓节段挫裂伤。在手术前及术后每天对大鼠进行BBB评分。手术后，立即采用大剂量冲击疗法腹腔注射甲基强的松龙30mg／kg，伤后1h开始，按5.4 mg／kg·h计算23h总量，分4次腹腔注射，在不同时间点处死大鼠。以4％多聚甲醛固定液灌注固定大鼠，取损伤节段上、下长约0.5cm脊髓入4％多聚甲醛后固定、修块、沉底。连续冰冻切片，片厚25μm，间隔取片后分别以抗神经丝蛋白、突触素抗体行免疫组化ABC染色。在光学显微镜下观察各组NF、SYP在SD大鼠脊髓的表达分布情况。进行组间多个样本比较的双因素方差分析和不同部位样本均数的X~2检验。[结果]1．病理学检查SCI组脊髓组织出血、水肿明显，白质出现轴突水肿、空泡变性，以后伤处形成囊腔和胶质瘢痕。而甲基强的松龙、咯利普兰可明显改善损伤脊髓的病理形态。2．SCI组、MP组NF染色轴突数目的表达变化SCI组NF染色轴突数目在1、3天进行性下降，7天最低，14、21、28天进行性升高，但28天时仍未恢复到1天水平。MP组NF染色轴突数目变化同SCI组相似。但1天时MP组NF染色轴突数目少于SCI组，3天时MP组NF染色轴突数目与SCI组无显著差异，7、14、21、28天时MP组NF染色轴突数目均明显高于SCI组。28天时MP组NF染色轴突数目明显高于MP1天组，但仍低于假损伤组。SCI后4周，ROL组NF染色轴突数目明显高于相应节段SCI组。3．SCI组、MP组NF染色灰度值的表达变化SCI组和MP组NF染色灰度值在1、3天进行性升高，7天达最高，14、21、28天进行性下降，各相邻时间点有显著性差异。1天时MP组灰度值高于于SCI组，3天时MP组灰度值与SCI组无显著差异，7、14、21、28天时MP组灰度值均明显低于SCI组。SCI后4周，ROL组NF灰度值明显低于相应节段SCI组。4．SCI组、MP组SYP染色灰度值的表达变化SCI组和MP组SYP灰度值在1、3天时较对照组明显升高，3天时最高，以后灰度值进行性下降，在28天达到最低，但仍高于假损伤组。1天时MP组SYP灰度值高于SCI组，3天时MP组与SCI组无显著差异，以后MP组SYP灰度值均明显低于SCI组。SCI后4周，ROL组SYP灰度值明显低于相应节段SCI组。5．神经学行为的比较假损伤组的神经功能稳定，表现正常。SCI组、MP组所有动物在术后第1天BBB评分为0，随后BBB评分有自然恢复，MP治疗组较SCI组相同时间点神经学功能均有明显提高。SCI后4周，ROL组较SCI组BBB评分明显提高，但仍低于假损伤组。[结论]1．用改良A1len法制作脊髓损伤模型简单可靠，重复性好，伤情稳定、均一，较为符合临床。2．神经丝蛋白与突触素结合应用能够更为客观的反映脊髓损伤的不同伤情及伤后神经功能变化，可以作为脊髓损伤后再生评价的较为量化的指标。3．脊髓损伤大鼠运动功能改善与损伤及邻近区域轴突数目的多少、神经丝蛋白以及突触素的表达量呈正相关。4．大剂量甲基强的松龙没有改变脊髓损伤后轴突总体的溃便修复过程，但在脊髓损伤中后期明显促进了损伤后的再生，具有中远期疗效。5．早期长时间低浓度应用咯利普兰治疗大鼠脊髓损伤效果明显、可靠。