索拉非尼联合奥沙利铂对人肝癌细胞BEL-7402的作用及索拉非尼耐药蛋白的基础研究

论文摘要

原发性肝癌是一种对人类生存威胁较大的肿瘤,是癌症致死的第三大原因,近年来其发病率在呈逐年升高的趋势。传统的化学疗法及肝动脉化疗栓塞术（transcatheter arte-rial chemoembolization,TACE）是目前肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）非手术疗法中应用最广泛的方法,但其远期疗效较差,未能证实对晚期肝癌患者存在生存益处。靶向治疗作为一项极具潜力的新方法,已逐渐成为肝癌临床治疗的一部分。索拉非尼是一种独特的多靶点抗肿瘤药物,既抑制肿瘤细胞的增殖,又抑制了肿瘤血管的形成,从而抑制肿瘤转移。从国外的临床试验和文献报道来看,该药治疗肝癌耐受良好,不良反应较轻,且容易处理。在SHARP试验中显示,索拉非尼组总生存期（OS）增加了44%,是第一个显著延长晚期HCC患者总生存期的全身治疗性药物;奥沙利铂作为第3代铂类药物,临床前研究证实对肝癌细胞疗效较好。实验研究证明这两种药物之间无药代动力学的影响,所以观察索拉非尼联合奥沙利铂对人肝癌细胞的作用,以及单药索拉非尼耐药机制的基础研究,可以为临床抗癌药物联合应用方案的设计提供参考,达到增加疗效,减少不良反应的目的。并且为指导索拉非尼的临床应用具有一定的现实意义。目的:观察索拉非尼联合奥沙利铂作用于人肝癌细胞BEL-7402的疗效及耐药相关蛋白Pgp和ABCG2在单药索拉非尼作用人肝癌细胞BEL-7402的表达情况。方法:采用人肝癌细胞株BEL-7402作为研究对象,以奥沙利铂和索拉非尼两者不同的给药顺序来观察何种方式作用于人肝癌细胞BEL-7402效果较好。MTT法计算BEL-7402/OXA和BEL-7402/sorafenib的半数致死浓度（IC50）;电镜观察药物作用于细胞后的细胞形态变化和超微结构的改变;流式细胞仪对细胞周期分布及细胞凋亡的变化进行分析;Westernblot检测单药索拉非尼作用于细胞BEL-7402后的耐药蛋白的表达情况,检测的耐药蛋白包括:P糖蛋白（Pgp）和乳癌耐药相关蛋白（ABCG2）。结果:1.BEL-7402/sorafenib, BEL-7402/OXA,的半数致死浓度IC50分别为2.17-8ug/mL,5-15.35ug/mL。2.电镜观察发现索拉非尼与奥沙利铂分别作用后,人肝癌细胞BEL-7402体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染,呈现凋亡早期的形态学改变。3.流式细胞仪结果显示:索拉非尼对人肝癌细胞BEL-7402有一定的抑制作用,阻滞细胞周期于S期,细胞凋亡率为25.66%;奥沙利铂对人肝癌细胞BEL-7402的增殖有一定的抑制作用,阻滞细胞周期于S期及G2/M期,细胞凋亡率为19.39%;先给奥沙利铂后给索拉非尼阻滞细胞周期于S期及G2/M期,细胞凋亡率为38.54%;先给索拉非尼后给奥沙利铂阻滞细胞周期于S期及G2/M期,细胞凋亡率为31.32%。4.Western印记分析法显示人肝癌细胞BEL-7402在高浓度间歇sorafenib组和低浓度持续sorafenib组均检测到ABCG2的表达,且ABCG2在低浓度持续sorafenib组表达高于高浓度间歇sorafenib组;Pgp表达基本没有变化。结论:1.人肝癌细胞BEL-7402体外对索拉非尼和奥沙利铂均为高度敏感,且两着联合应用有协同抑制作用,且先给奥沙利铂模式的给药方式效果更好。2.人肝癌细胞BEL-7402在索拉非尼持续低浓度的给药方式下更容易产生耐药。3.人肝癌细胞BEL-7402对索拉非尼的耐药现象与乳癌耐药相关蛋白（ABCG2）的高表达相关;P糖蛋白（Pgp）可能没有参与这个耐药过程。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢