三株深海来源微生物的菌种鉴定及其生物活性的初步评价

三株深海来源微生物的菌种鉴定及其生物活性的初步评价

论文摘要

深海沉积物覆盖了地球表面积的50%以上,深海微生物处于高压、低温(部分区域如热液口为高温)、厌氧、极端pH、高盐浓度、高金属浓度、无光照、寡营养、高卤素等特殊极端环境中。由于其生态环境的特殊性,决定了深海微生物具有一些特异的代谢途径和遗传背景,导致深海微生物生物多样性和生物活性多样。本文利用中国大洋一号20航次采集的31个深海沉积物样品,选择性地分离放线菌和真菌,并进行了细胞毒及抗致病菌活性检测。共分离得到4株放线菌,19株真菌,其中一株新菌—放线菌YLB-01T,两株潜在新菌—真菌Eu4、Eu17。运用现代多相分类鉴定研究方法,对新菌YLB-01T从形态学,生理生化特征,化学分类特征及分子分类方面的进行了鉴定,确定了这株放线菌的分类地位,将其命名为沉积微杆菌(Microbacterium sediminis sp.nov. )。同时也对Eu4和Eu17两株真菌进行形态和系统进化分析,得出:菌株Eu4为子囊菌纲(Ascomycetes)散囊菌目(Eurotiales)发菌科(Trichocomaceae)翅孢壳属(Emericellopsis sp.),最适生长温度为28℃,最适生长培养基为PDA,具有较强的耐压性能(80MPa);菌株Eu17为子囊菌纲(Ascomycetes)肉座菌目(Hypocreales)瘤座孢科(Tuberculariaceae)镰孢属(Fusarium sp.),最适生长温度为20℃,最适生长培养基为YM,耐压性能较弱(40 MPa)。根据ITS序列最高同源性<98%,可判断为潜在新种,因此需结合生理生化特征,对Eu4和Eu17做进一步鉴定。将以上三株菌接种于不同培养基培养,利用乙酸乙酯萃取的方法,提取浸膏,并用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法检测其粗提物的细胞毒活性,并通过打孔培养,滤纸贴片法检测其抗菌活性,结果发现,YLB-01T的抽提物有微弱的细胞毒和抗致病菌活性,Eu4的抽提物有抗致病菌活性,但没有细胞毒活性,Eu17的抽提物有很强的细胞毒和抗致病菌活性。

论文目录

  • CONTENTS
  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 前言
  • 1.1 海洋微生物研究概况
  • 1.2 海洋微生物的多样性
  • 1.2.1 海洋细菌
  • 1.2.2 海洋古菌
  • 1.2.3 海洋真菌
  • 1.2.4 海洋病毒
  • 1.3 海洋微生物活性代谢产物的研究概况
  • 1.3.1 海洋细菌、放线菌产生的活性代谢产物
  • 1.3.2 海洋真菌产生的活性代谢产物
  • 1.3.3 海洋微藻产生的活性代谢产物
  • 1.4 本课题研究目的、内容及技术路线
  • 第二章 材料与方法
  • 2.1 材料
  • 2.1.1 深海沉积物样品
  • 2.1.2 菌株与细胞株
  • 2.1.3 常用培养基
  • 2.1.3 主要试剂
  • 2.1.4 主要仪器设备
  • 2.1.5 引物
  • 2.1.6 序列分析软件
  • 2.1.7 常用溶液配制
  • 2.2 主要方法
  • 2.2.1 菌种分离和鉴定
  • 2.2.2 次级代谢产物活性的研究
  • 2.2.3 放线菌多相分类鉴定
  • 第三章 结果与分析
  • 3.1 放线菌分离结果
  • TT多相分类研究'>3.2 放线菌YLB-01TT多相分类研究
  • T形态特征'>3.2.1 YLB-01T形态特征
  • T生理生化特征'>3.2.2 YLB-01T生理生化特征
  • T细胞壁化学组分分析'>3.2.3 YLB-01T细胞壁化学组分分析
  • T分子分类研究'>3.2.4 YLB-01T分子分类研究
  • T鉴定结果与分析'>3.2.5 YLB-01T鉴定结果与分析
  • 3.3 真菌分离结果
  • 3.4 两株真菌多相分类研究
  • 3.4.1 形态特征
  • 3.4.2 培养特征观察
  • 3.4.3 耐压性检测
  • 3.4.4 ITS rDNA 序列分析
  • 3.4.5 β-tubulin 序列分析
  • 3.4.6 两株真菌鉴定结果
  • 3.5 三株潜在新种生物活性检测
  • 3.5.1 三株潜在新种发酵粗提物的制备
  • 3.5.2 三株潜在新种细胞毒活性检测
  • 3.5.3 三株潜在新种抗致病菌活性检测
  • 3.5.4 三株潜在新种生物活性检测结果
  • 第四章 小结与展望
  • 4.1 小结
  • 4.2 展望
  • 附录
  • 参考文献
  • 致谢
  • 相关论文文献

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