联合应用神经营养因子对周围神经再生的影响及其可视化研究

论文题目: 联合应用神经营养因子对周围神经再生的影响及其可视化研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物医学工程

作者: 陈菁

导师: 彭承琳

关键词: 神经营养因子,联合应用,周围神经再生,可视化

文献来源: 重庆大学

发表年度: 2005

论文摘要: 神经营养因子(Neurotrophic Factors,NTF)是机体产生的调控神经细胞存活、生长、分化的一类可溶性蛋白质,周围神经损伤后内源性神经营养因子的不足是导致神经再生障碍及功能恢复不良的重要原因,联合应用多种外源性神经营养因子促进神经再生已逐步成为进一步提高神经修复疗效的重要方法。但目前有关多种神经营养因子的联合应用还存在需要进一步研究的问题:其一是不同种类的外源性神经营养因子之间的配方以及使用的时间和剂量问题。各种神经营养因子对神经元的作用具有一定选择性和交叉性,选择适当的神经营养因子组合才能发挥协同作用,产生复合生物学效应。此外,由于周围神经损伤后不同神经营养因子的表达变化差异很大,有的表达增加,有的表达降低,且增加(或降低)的幅度和时相有所不同,必须根据各种因子在损伤后表达的变化特点有针对性地确定该因子使用的时间和剂量,才能最大效率地促进神经再生。其二是不同神经神经因子表达的检测问题。以往由于不同的研究者所采用的实验动物、损伤模型、表达检测方法和定量方法各不相同,对不同神经营养因子的表达,其结果之间的可比较性受到影响,甚至针对同一种神经营养因子在神经再生过程中的变化趋势,不同研究者的实验结果也不尽相同。因此,在相对一致的条件下同时检测多种神经营养因子的共表达对准确了解神经再生过程中各种神经营养因子的变化规律尤为重要。其三是再生神经结构重建的评价问题。现有的二维平面观察难以准确、完整地反映再生神经组织的解剖结构。针对上述三个问题,本课题以三种典型的神经营养因子NGF(nerve growth factor,神经生长因子)、CNTF(ciliary neurotrophic factor,睫状神经营养因子)和GDNF(glial cell line- derived neurotrophic factor,胶质细胞源性神经营养因子)为研究对象,基于大鼠背根神经节感觉神经元(dorsal root ganglion neurons,DRGn)、脊髓前角运动神经元(spinal motor neurons,SMN)与雪旺细胞(Schwann cells,SCs)共同培养模型建立多种神经营养因子共表达的可视化和数量化的检测分析方法,探明三种神经营养因子共表达的变化规律;在此基础上根据NGF、CNTF和GDNF共表达的变化特点,确定联合应用外源性NGF、CNTF和GDNF促进大鼠坐骨神经再生的合理给药方式,并通过体内外实验阐明并验证联合应用外源性NGF、CNTF和GDNF对周围神经再生的协同促进作用;最后从方法学角度探讨周围神经组织显微结构的三维成像技术,从而更为准确地评价神经营养因子对再生神经结构恢复的促进作用。经过上述研究获得如下结果和结论:(1)多种神经营养因子在活细胞条件下的

论文目录:

中文摘要

英文摘要

1 绪论

1.1 问题的提出及研究意义

1.1.1 联合应用神经营养因子对周围神经再生的影响及研究意义

1.1.2 神经营养因子共表达的可视化和数量化及研究意义

1.1.3 周围神经组织的可视化及对再生神经形态学评价的研究意义

1.2 国内外研究现状

1.2.1 神经营养因子表达变化及其检测分析方法的研究现状

1.2.2 联合应用神经营养因子治疗周围神经损伤的研究现状

1.2.3 周围神经损伤与再生的形态学研究现状

1.3 本文研究的目的和研究内容

1.3.1 课题来源

1.3.2 本文研究的目的

1.3.3 本文研究的主要内容

2 NGF、CNTF 与 GDNF 共表达的可视化和数量化研究

2.1 引言

2.2 雪旺细胞与神经元共培养模型的建立

2.2.1 材料与方法

2.2.2 结果

2.2.3 讨论

2.3 NGF、CNTF 与GDNF mRNA 的共表达成像

2.3.1 材料与方法

2.3.2 结果

2.3.3 讨论

2.4 NGF、CNTF 和GDNF 共表达的定量分析

2.4.1 材料与方法

2.4.2 结果

2.4.3 讨论

2.5 本章小结

3 联合应用 NGF、CNTF 和 GDNF 对神经元的协同作用及对大鼠坐骨神经再生的影响

3.1 引言

3.2 NGF、CNTF 和GDNF 对神经元的协同作用

3.2.1 材料与方法

3.2.2 结果

3.2.3 讨论

3.3 联合应用NGF、CNTF 和GDNF 对大鼠坐骨神经再生的影响

3.3.1 材料与方法

3.3.2 结果

3.3.3 讨论

3.4 本章小结

4 再生神经显微结构的可视化研究

4.1 引言

4.2 材料与方法

4.2.1 实验动物及分组

4.2.2 实验材料与制备

4.2.3 实验方法

4.3 结果

4.3.1 大体标本观察

4.3.2 光镜观察结果

4.3.3 三维重建结果

4.4 讨论

4.4.1 周围神经损伤与再生的病理生理过程

4.4.2 周围神经组织连续切片三维重建的技术要求

4.4.3 三维重建在周围神经再生研究中的意义

4.5 本章小结

5 结论与展望

5.1 主要结论

5.1.1 在细胞水平和组织水平建立了周围神经损伤后再生过程的可视化研究方法

5.1.2 通过体内外实验明确了联合应用NGF、CNTF 和GDNF 对周围神经再生具有协同作用

5.1.3 主要创新点

5.2 后续研究工作的展望

致谢

参考文献

附录

独创性声明

学位论文版权使用授权书

发布时间: 2006-12-05

参考文献

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