生物转化等人参制品中皂苷的系统分析

论文摘要

本文主要研究了原料人参的主要皂苷,研究了人参总皂苷中人参二醇皂苷（PPD）转化生成C-K的微生物酶发酵培养基;研究了几十种人参、红参皂苷的分析方法;研究了活性红参片、红参浸膏、红参复方药等人参制品中主要稀有皂苷测定方法。首先分析了人参原料:人参、西洋参、三七参的主根、须根中的主要皂苷、各皂苷含量及比例。人参、西洋参的须根中总皂苷含量是主根总皂苷的1.5倍;三七参主根中总皂苷含量高于须、根,高3倍。人参中主要皂苷为Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1等,其皂苷含量差别不是很大,含有特征皂苷Rf、含量为5%～8%,还含有微量的R1。西洋参中Re、Rb1含量较高,占总皂苷的40%～50%。三七参主根、须根总皂苷组成相似,Rg1、Rb1含量较高,占总皂苷的70%;特征皂苷R1含量为9%～10%。这为研究市售人参皂苷类制品所使用的人参原料和功效提供了科学的方法。人参口服后,人参总皂苷中的原人参二醇类皂苷（PPD）在消化系统内,转化为C-K,吸收起药效。本文研究了将PPD皂苷转化为C-K酶的sp.848菌株的廉价产酶培养基;其酶反应的最适底物浓度7%;在温度50°C、pH5.0、酶反应时间22小时,PPD皂苷转化C-K的转化率为80%以上。为了分析红参等人参制品中的皂苷,首先采用超高效液相色谱-质谱联用法对红参稀有皂苷 20（S）-Rg3、20（R）-Rg3、Rg5、Rk1;20（S）-Rh2、20（R）-Rh2、Rh3、Rk2;20（S）-R h1、20（R）-Rh1、Rh4、Rk3;、20（S）-Rg2、20（R）-Rg2、Rg4（F4）和 Rg6 的结构和分子量进行分析、确认,为活性红参片、红参浸膏中人参皂苷的鉴别和分析打下了基础。为了研究对红参制品中人参皂苷转化情况,对不同种类活性红参片中皂苷进行分析、比较,并研究了红参浸膏中各人参皂苷含量。沈阳天乐园活性红参片利用人参自身的人参皂苷酶等物质,使人参中上火成分Re、Rg1的含量降低到西洋参水平,将稀有皂苷 Rg2、F2、20（S）-Rg3、20（R）-Rg3、Rg5、Rk1 C-K、20（S）-Rh2、20（R）-Rh2、Rh3、Rk2等在红参中的含量比例提高到传统红参片的十几倍。红参浸膏中大部分的人参主要皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1等,转化为易吸收、活性高的红参稀有皂苷20（S）-Rg3、20（R）-Rg3、R95、Rk1、20（S）-Rh2、20（R）-Rh2、Rh3、Rk2、20（S）-Rg2、20（R）-Rg2、Rg4（F4）、Rg6、Rk3、Rh4、20（S）-Rh1、20（R）-Rh1 等。本文也研究了复方中药--益气复脉注射剂中的人参皂苷含量;用高效液相色谱法建立了测定益气复脉注射剂中14种人参皂苷Rg1、Rf、Rb1 Rb2、Rc、Rg2、Rd、F2、Rh4、Rk3、20（S）-Rg3、20（R）-Rg3、Rk1、Rg5的方法。每种人参皂苷配置6种浓度、每种浓度检测3次,绘制人参皂苷校正曲线,其r2值均大于0.999,说明其线性关系良好;在此基础上进行了该方法的精密度、耐用性、稳定性、重现性等试验,人参皂苷的平均回收率为96.21%。该方法快速、准确,不仅用于益气复脉注射剂的质量监控和评定,也可以用其他人参复方中药中的人参皂苷测定。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 人参的概述
• 1.1.1 人参的植物形态及生长环境
• 1.1.2 人参的种类
• 1.1.3 人参的化学成分
• 1.2 人参皂苷
• 1.2.1 人参皂苷的分类及结构
• 1.2.2 人参皂苷的理化性质
• 1.2.3 人参皂苷的生理活性及药效
• 1.2.4 不同种类人参中人参皂苷的分布
• 1.3 稀有人参皂苷Compound-K
• 1.3.1 人参皂苷C-K的结构
• 1.3.2 人参皂苷C-K的生理活性及药效
• 1.3.3 生物转化人参皂苷C-K的现实意义
• 1.3.4 生物转化人参皂苷C-K的方法及研究进展
• 1.4 人参皂苷的提取、分离及分析鉴定
• 1.4.1 人参皂苷的提取
• 1.4.2 人参皂苷的分离和提纯
• 1.4.3 人参皂苷的分析鉴定方法
• 1.4.4 人参制品中人参皂苷分析方法的建立
• 1.5 人参皂苷的转化
• 1.6 本论文研究的目的与意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 试剂与仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 各种人参根、须中各皂苷含量分析
• 2.2.2 生物转化法制备人参皂苷C-K
• 2.2.3 四组稀有人参皂苷的分析
• 2.2.4 活性红参片、红参浸膏中皂苷含量的测定
• 2.2.5 复方中药:益气复脉注射剂中人参皂苷含量测定方法
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 人参、西洋参和三七参不同部位中皂苷组成和比例的研究
• 3.1.1 三种人参各部位总皂苷含量
• 3.1.2 薄层层析法（TLC）测定不同种类人参主根、须根皂苷成分
• 3.1.3 高效液相色谱法（HPLC）测定不同种类人参主根、须根皂苷成分
• 3.2 生物转化法制备人参皂苷C-K
• 3.2.1 产人参皂苷酶菌种的选择和培养基优化
• 3.2.2 最适酶反应条件的选择
• 2、Rg₃、Rh₁、Rh₂组的分析'>3.3 稀有人参皂苷Rg₂、Rg₃、Rh₁、Rh₂组的分析
• 3.3.1 高效液相色谱法（HPLC）检测样品
• 3.3.2 超高效液相色谱-质谱联用法检测各组样品中人参稀有皂苷的分子量
• 3.4 活性红参片、红参浸膏中皂苷含量测定
• 3.4.1 活性红参片中人参皂苷组成及含量的检测
• 3.4.2 红参浸膏中人参皂苷组成及含量的检测
• 3.5 复方中药:益气复脉注射剂中皂苷含量测定方法的建立
• 3.5.1 益气复脉注射剂中人参皂苷的HPLC检测
• 3.5.2 校正曲线、检测限和定量限的确定
• 3.5.3 方法的精密度和回收率
• 3.5.4 耐用性试验
• 3.5.5 稳定性试验
• 3.5.6 方法的重现性
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢