论文题目: 人羊膜细胞在创伤性脑损伤中应用的实验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 神经外科学
作者: 卢奕
导师: 惠国桢,郭礼和
关键词: 人羊膜细胞,创伤性脑损伤,移植,基因治疗,大鼠
文献来源: 苏州大学
发表年度: 2005
论文摘要: 【目的】:创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)发病率高,但传统治疗方法疗效有限。人羊膜细胞(human amniotic cells,HACs)具有多潜能性、移植后不会诱导免疫排斥反应、有足够的细胞来源,还可表达神经细胞特异标记,分泌神经营养因子。本实验拟将HACs 置于创伤性脑组织提取液的条件培养基中探究HACs 在体外模拟创伤性脑损伤微环境下的分化和增殖情况,并用HACs 和表达胶源性神经生长因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)的HACs 靶点移植于大鼠TBI 模型以探究二者分别对TBI 大鼠运动功能和海马神经元的影响。【方法】:取无并发症剖宫产羊膜,剥离羊膜1 小时内用0.25%胰酶反复消化三次提取HACs,接种后48h 去除未贴壁的HACs。采用Feeney 法制作大鼠TBI 模型,TBI24h后制备创伤性脑组织提取液。将HACs分别接种于RPMI1640培养基(1640)、RPMI1640 培养基与正常脑组织提取液(1640+NB)、RPMI1640 培养基与创伤性脑组织提取液(1640+TBI)3 组。共培养7 天后倒置相差显微镜检测各组细胞形态。共培养前后分别行Nestin 和MAP2 单抗免疫组化检测。将HACs 以10000/ml 和100000/ml 两种密度分别接种上述3 种培养基,培养1 天、4 天、7 天后经酶联免疫检测仪行四氮唑盐(MTT)比色法检测。Hoechst33342 标记HACs 重悬调整细胞浓度为10~5/μl;采用Feeney 自由落体法打击大鼠脑皮层后肢运动区域,使损伤皮层对侧后肢运动功能受损。损伤后24h 经微量注射器和立体定向仪将Hoechst33342 标记的HACs 10μl 分别移植于挫伤灶中心和挫伤灶边缘。实验分治疗组(TBI+HACs)、对照组(TBI+PBS)和假TBI 组3 组。在TBI 后的28 天内采用钉板平衡木行走测试评估损伤皮层对侧后肢运动功能变化。运动功能检测结束后经心脏灌注4%多聚甲醛后取出脑组织制成切片后分别行荧光显微镜检测、HE 染色和MAP2 免疫组化染色检测。采用Feeney 法撞击部位以前囟人字缝中点矢状缝左侧2mm 为中心制作TBI 致海马神经元损伤模型。TBI24h 后各组于挫伤灶边缘,每处距硬脑膜4mm 和2mm 两点移植,共5μl 含5×10~5个细胞。TBI+GDNF 组移植表达GDNF 的HACs;TBI+eGFP 组移植表达eGFP 的HACs;TBI+PBS 组注射5μlPBS;假TBI 组不移植。移植7 天后开始每天行Morris 水迷宫定位航行试验。移植后12 天空间搜索试验结束后一部分取出脑组织检测损伤侧海马变化,一部分取移植靶点区域脑组织行RT-PCR 检测GDNFmRNA
论文目录:
序言
第一部分 HACs 与创伤性脑组织提取液共培养的实验研究
中文摘要
英文摘要
材料和方法
结果
讨论
参考文献
附图
第二部分 靶点移植HACs 对TBI 大鼠运动功能的影响
中文摘要
英文摘要
材料和方法
结果
讨论
参考文献
附图
第三部分 移植表达GDNF 的HACs 对TBI 大鼠海马神经元的作用
中文摘要
英文摘要
材料和方法
结果
讨论
参考文献
附图
小结
综述 创伤性脑损伤的移植治疗研究
攻读博士期间发表论文
缩略词语
致谢
发布时间: 2006-03-24
参考文献
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