腺病毒介导的hBMP-7基因治疗骨缺损的实验研究

论文题目: 腺病毒介导的hBMP-7基因治疗骨缺损的实验研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 外科学

作者: 鱼兵

导师: 范清宇

关键词: 骨缺损,骨髓基质干细胞,骨形成蛋白,基因治疗,骨组织工程

文献来源: 第四军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的克隆人骨形成蛋白7基因全长并以AdEasy腺病毒表达系统制备携带BMP-7基因的高滴度腺病毒,感染兔骨髓基质干细胞,利用外源性基因编码的生长因子诱导其表达成骨细胞表型。再将转染的MSCs与高分子生物材料PLGA支架相复合,在体外构建组织工程化骨,移植修复兔自体桡骨缺损,观察该方法的可行性和有效性,以期找到一种较好的修复骨缺损的方法。方法 (1)采用逆转录PCR方法自人胎盘组织提取的总RNA中扩增获得BMP-7基因,经测序后与Genbank中序列进行比较分析。(2)将BMP-7基因cDNA克隆到穿梭载体形成转移质粒pAdTrack-CMV-BMP-7,经PmeI酶切线性化后与骨架质粒感受态细胞AdEasier-1 Cells经电穿孔法同源重组得到腺病毒质粒pAdBMP-7并酶切鉴定,PacI酶切线性化后转染293细胞包装后获得复制缺陷型重组腺病毒AdBMP-7。(3)采用密度梯度离心法自骨髓中分离培养兔骨髓基质干细胞,观察原代及传代MSCs形态特点、生长特性和特殊染色,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性。(4)以复制缺陷重组腺病毒介导人BMP-7基因转染MSCs后,以MTT法及流式细胞仪观察转染对细胞增殖活力及细胞周期的影响;用RT-PCR法、免疫组化染色以及Westernblot证实转基因MSCs的BMP-7蛋白和I

论文目录:

缩略语表

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英文摘要

前言

文献回顾

1.骨缺损临床治疗进展

2.骨形成蛋白在骨缺损研究中的应用

3.骨组织工程研究进展

4.骨缺损局部基因治疗研究进展

研究内容

实验一人骨形成蛋白7基因的克隆和测序分析

实验二 BMP-7基因腺病毒表达载体的构建及重组腺病毒的制备

实验三兔骨髓基质干细胞的分离和特性观察

实验四腺病毒介导BMP-7基因体外诱导MSCs的分化

实验五组织工程化骨的构建与观察

实验六 BMP-7基因增强的组织化工程骨修复骨缺损实验

小结

参考文献

个人简历和攻读学位期间的研究成果

致谢

发布时间: 2005-07-19

参考文献

[1].HuVEGF121基因修饰复合材料修复兔桡骨火器性骨缺损的实验研究[D]. 王建忠.第三军医大学2004
[2].甲壳素衍生物促进骨缺损愈合作用的研究[D]. 金黎明.中国海洋大学2004
[3].bFGF基因转染MSCs复合纳米仿生骨治疗骨缺损的实验研究[D]. 李连欣.山东大学2004
[4].骨髓间充质干细胞体外生物学特性及经皮注射修复骨缺损的实验研究[D]. 庞金辉.复旦大学2005
[5].组织工程技术修复骨缺损的相关实验研究[D]. 段小军.第三军医大学2005
[6].nHAC/PLA材料修复骨缺损的实验研究[D]. 张晛.中国人民解放军军医进修学院2005
[7].腺病毒介导的mCbfa1基因治疗骨缺损的实验研究[D]. 张勇.第四军医大学2006
[8].复合材料修复骨缺损的实验研究[D]. 周勇.第四军医大学1998
[9].多孔β-TCP/BMP复合物的研制及动物体内的相关研究[D]. 梁戈.第四军医大学1996
[10].低强度脉冲超声波影响兔骨髓基质干细胞与β-磷酸三钙复合修复骨缺损的实验研究[D]. 梁伟.第二军医大学2007

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