盐酸克伦特罗快速检测试剂盒的研制与开发

论文摘要

盐酸克伦特罗（CL）是β-兴奋剂的一种,具有促进动物生长,提高饲料利用率,改善瘦肉率的作用。但该药排泄速率慢,易蓄积在动物组织中,引起消费者发生急性中毒,目前已被大多数国家列为违禁药,然而,CL滥用和残留的问题仍然存在,灵敏、有效的残留检测方法是控制残留的基本手段。目前国际上多使用ELISA方法作为CL快速检测的筛选方法,国内检测机构一般采用进口试剂盒进行检测,成本高,到货周期长,售后没有保证,但是在这一领域的国产试剂盒产品又存在着稳定性差,假阴性、假阳性率高等缺点,从而使国产试剂盒在这方面迟迟未打开市场。本实验着力于研制出稳定性好,假阴/阳性率低,能够与国外产品相媲美的CL快速检测试剂盒。本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,通过优化条件得到最终反应条件为:包被抗原约0.2μg/mL,抗体工作浓度约为0.059μg/mL,总体反应时间为90min,酶标二抗的稀释倍数为1:1000。建立的标准曲线的线性范围为0-8ng/mL,IC50平均为1.0ng/mL,最低检测限（LOD）达0.1ng/mL,标准点批内变异系数为1.28-13.19%,批间变异系数在5-15%之间,试剂盒保存期在1年以上。与荷兰（ED）试剂盒比对实验表明,本试剂盒的回收率在80%-120%之间,高于ED试剂盒的50%-80%的样品回收率,同时本试剂盒可以保持稳定1年以上,这与ED试剂盒相当,领先于国内试剂盒。总之,在标准点符合程度、曲线参数、实际样品回收率等方面与ED试剂盒的测量结果相当,部分指标甚至优于ED试剂盒,从而证明了本试剂盒的可用性和替代国外试剂盒的可能性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1. 绪论
• 1.1 概述
• 1.2 盐酸克伦特罗的理化性质与危害
• 1.2.1 盐酸克伦特罗的理化性质
• 1.2.2 盐酸克伦特罗的药理作用
• 1.2.3 “瘦肉精”的由来
• 1.2.4 “瘦肉精”中毒记载
• 1.2.5 “瘦肉精”中毒机理
• 1.3 盐酸克伦特罗分析方法综述
• 1.3.1 盐酸克伦特罗的检测方法
• 1.3.2 CL 检测技术的未来趋势和发展方向
• 1.3.3 现有试剂盒产品
• 1.3.4 本研究的目的和意义
• 2. CL 间接竞争ELISA 检测方法的建立
• 2.1 关键原料的准备
• 2.1.1 实验仪器和试剂
• 2.1.2 单抗的筛选
• 2.1.3 抗原偶联物的制备和鉴定
• 2.1.4 本部分小结
• 2.2 间接竞争ELISA 分析方法的建立和优化
• 2.2.1 实验仪器与试剂
• 2.2.2 初步探索
• 2.2.3 包被条件优化
• 2.2.4 最佳单抗工作浓度的确定
• 2.2.5 最佳竞争反应条件优化
• 2.2.6 竞争抗原和单抗的最佳容量配比的确定
• 2.2.7 缓冲体系的影响
• 2.2.8 标准点的选择
• 2.2.9 标准曲线的建立
• 2.2.10 本部分小结
• 3. 试剂盒的开发
• 3.1 试剂盒稳定性研究
• 3.1.1 单抗保护剂
• 3.1.2 酶标二抗保护剂
• 3.1.3 包被物保护
• 3.2 试剂盒测试
• 3.2.1 试剂盒的组装
• 3.2.2 最低检测限测定
• 3.2.3 稳定性测试
• 3.2.4 重现性
• 3.2.5 实际样品测量
• 3.2.6 本章小结
• 4. 与荷兰ED 试剂盒的对比试验
• 4.1 标准点符合度比较结果
• 4.2 实际样品测定结果比较
• 4.3 本章小结
• 5. 结论与展望
• 致谢
• 参考文献