当归多糖对大鼠肝性脑病的预防作用及其机制的实验研究

论文摘要

目的:我国是肝病患者人数众多的国家,许多慢性肝病患者最终发展到肝硬化,并发肝性脑病（hepatic encephalopathy, HE）,生存率低,预后差,严重影响人的寿命和生存质量,而目前尚没有一种治疗肝硬化和HE的特效药物,对HE的病理生理机制和治疗药物的研究还在不断探索中。目前的普遍观点认为高血氨在HE的发生发展中起重要作用。氨通过血脑屏障扩散入脑内,在谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase, GS）催化下,由三磷酸腺苷供能与谷氨酸在星形胶质细胞中合成谷氨酰胺[1]。星形胶质细胞是脑内唯一有GS的细胞,代表了脑内主要的氨解毒部位,又是摄取兴奋性氨基酸谷氨酸的主要部位。在氨浓度增高时,星形胶质细胞肿胀,对神经元的营养支持减少,兴奋性氨基酸谷氨酸摄取减少,持续刺激神经元。同时星形胶质细胞将氨与谷氨酸合成谷氨酰胺而解毒的作用也减弱,脑内氨浓度增加,由此形成恶性循环,打破这种循环可能是治疗HE和改善HE症状的一个途径。当归多糖（Angelica Sinensis Polysaccharide,ASP）是我国传统中药当归中主要的水溶性成分,具有多种功效。ASP从当归中提取,不管是总多糖还是其多糖各组分,都对肝脏损伤有治疗作用。ASP可以干预小鼠的急性酒精性肝损伤,增加肝能量储备和对抗脂质过氧化[2]。ASP还对小鼠四氯化碳性肝损伤有良好的保护作用,可降低血谷草转氨酶和肝脏谷胱甘肽s-转移酶活性[3]。因此我们推测ASP对慢性四氯化碳中毒形成的肝硬化和HE可能有一定的治疗作用。本实验的目的即为研究从当归中提取的ASP,对四氯化碳诱导产生的肝硬化大鼠的作用,是否可以延缓HE的发生,及其可能的机制,为肝硬化HE的治疗寻找一种新的途径。方法:第一部分:用微波辅助水提醇沉法从当归中提取ASP,用苯酚-硫酸法测定其中的总糖含量。第二部分:S-Dawley大鼠,分为正常对照组和诱导组。诱导组用40%的四氯化碳溶液做皮下注射。63天后内毒素3mg/kg腹腔注射,观察各组大鼠肝脏病理情况和大鼠脑电图（electroencephalogram,EEG）的特征有何差别。第三部分:S-Dawley大鼠,分为正常组、阴性组、阳性药物组、ASP10g/L组、ASP20g/L组、ASP40g/L组,除正常组外,其余均为肝硬化造模成功的大鼠。各组分别给与蒸馏水、蒸馏水、乳果糖、ASP10g/L液、ASP20g/L液、ASP40g/L液灌胃2周后,内毒素3mg/kg腹腔注射,记录昏迷发生时间,测定各组大鼠的血氨、谷丙转氨酶GPT、谷草转氨酶GOT值,和脑细胞凋亡数,星形胶质细胞数和脑组织谷氨酸转运体（glutamate transporter, GLT）和GS含量。结果:第一部分:从当归根中提取出当归多糖,总多糖含量68%。第二部分:诱导组大鼠肝脏有假小叶形成,肝硬化诱导成功,诱导组大鼠血氨值明显高于诱导前（P<0.01）。内毒素注射后,诱导组大鼠发生HE,脑电图出现特征性曲线。正常组大鼠血氨值与实验前比较无显著性差异,内毒素注射后无昏迷,脑电图正常。第三部分:阳性药物乳果糖和ASP各剂量组都可以延缓肝硬化大鼠HE的发生,降低血氨、GPT、GOT值,减少脑细胞凋亡,增加星形胶质细胞的数量,增加脑组织GLT和GS的含量,ASP40g/L溶液在延缓HE发生和降低血氨、GOT值,减少脑细胞凋亡,增加星形胶质细胞数和GLT含量上和乳果糖比较有显著性差异（P<0.05）。结论:当归多糖对四氯化碳造成的肝硬化有作用,可延缓HE的发生,其机制可能是改善肝功能,降低血氨、GPT、GOT值;保护脑细胞,减少脑细胞凋亡;增加星形胶质细胞的数量,增加脑组织GLT和GS的含量,增强脑内解除氨毒性的作用。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 当归多糖的提取与糖含量测定
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二部分 制作肝硬化动物模型
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三部分 当归多糖对大鼠肝性脑病的预防作用
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 总结
• 参考文献
• 附图
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士期间发表的文章