MicroRNA生物合成相关基因和ECT2在肝癌中的表达及其意义

论文摘要

原发性肝细胞癌是世界第五大常见肿瘤,死亡率高居第二。尽管肝癌的治疗手段包括手术切除、化疗、放疗、局部治疗及肝移植等已有了很大的进展,但肝癌病人的预后还是很差,即使根治术后5年生存率仅约30%-50%,而且复发率很高。对研究肝癌发生发展的分子机制,寻找肝癌早期诊断的更有效办法,探索转移复发的有效干预措施和治疗手段,将有助于肝癌病人的早期发现和改善预后。MicroRNAs是近年来发现的一类重要的基因调节分子,通过促进靶基因mRNA的降解、调控靶基因的翻译以及抑制靶基因的翻译,参与细胞分化、增殖与凋亡等一系列的重要过程。越来越多的研究表明miRNAs在肿瘤中表达水平异常；半数以上的miRNAs定位于与肿瘤发生相关的染色体区域和脆性位点,提示miRNAs在肿瘤发生发展中扮演重要的角色。我们前期研究发现microRNA表达谱与肝癌转移密切相关,建立了20个miRNA组成的分子预测标签；并在基因表达谱研究基础上进一步发现—肝癌转移相关候选基因—ECT2（一种可以作用于Rho GTP酶的鸟苷酸交换因子,GEFs）。本课题拟在此基础上,进一步研究microRNA生物合成相关基因和ECT2在肝癌发生发展中的作用,为肝癌的预后预测和筛选治疗靶点提供有价值的依据。第一部分MicroRNA生物合成相关基因在肝癌中的表达及其意义目的：通过检测肝癌和癌旁组织中miRNA合成相关基因Drosha、DGCR8、 Exportin5、Dicer、AG02、GEMIN3、GEMIN4、DBR1和ADAR的mRNA与蛋白表达,分析其与肝癌恶性行为的关系。方法：运用实时荧光定量PCR技术检测肝癌组织及其配对癌旁组织中miRNA生物合成相关基因的mRNA表达水平,比较分析其表达水平差异及其与肝癌预后的关系。进一步通过免疫组化染色检测另外一组肝癌组织及其癌旁组织中Dicer蛋白水平的表达及其与肝癌患者预后的相关性。结果：RT-PCR结果显示,与相应的癌旁组织相比,肝癌组织中细胞核内miRNA生物合成相关基因Drosha、DGCR8、DBR1、ADAR、Exportin5的mRNA表达水平显著升高（p<0.0001）,而细胞质内rniRNA生物合成相关基因Dicer、AG02、 GEMIN3、GEMIN4的mRNA表达水平显著下降（p<0.0001）。肝癌组织中DBR1mRNA高表达患者的总生存率高于低表达患者（p=0.0453）, Exportin5mRNA高表达患者的总生存率高于低表达患者（p=0.0294）,癌旁组织中DGCR8mRNA高表达患者的总生存率高于低表达患者（p=0.0111）。免疫组化显示,Dicer蛋白主要在癌旁组织的胞质中表达,且其在癌旁组织和肝癌组织中的表达有明显差异（p=0.0024）。结论：Dicer的表达降低可能在肝癌发生发展过程中起重要作用,在肝癌细胞中可能存在某种调控机制,诱导Dicer酶的下调,从而导致相关miRNA的下调。miRNA的生物合成可能存在负反馈,从而可以稳定miRNA的表达量。DBR1、 Exportin5和DGCR8可以作为肝癌治疗的潜在干预靶点。第二部分ECT2在肝癌中的表达及其意义目的：通过检测肝癌组织、癌旁和正常肝组织中ECT2的mRNA与蛋白表达以及不同转移潜能肝癌细胞以及正常肝细胞ECT2的mRNA与蛋白表达,分析其与肝癌恶性行为的关系。方法：运用实时荧光定量PCR技术检测肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织、高低转移潜能的人肝癌细胞系中ECT2的mRNA表达水平,比较分析其表达水平差异及其与肝癌转移潜能的关系。进一步通过免疫组化染色检测另外一套肝癌组织及其癌旁组织中ECT2蛋白水平的表达及其与肝癌患者预后的相关性。结果：RT-PCR结果显示,与正常肝脏组织相比,肝癌组织及癌旁组织中ECT2的mRNA表达水平显著提高（p<0.0001；p=0.0216）,且肝癌组织中ECT2的mRNA表达水平显著高于癌旁组织（p<0.0001）。ECT2mRNA在肝癌细胞株中表达明显高于正常肝细胞株（p=0.0189）,且在高转移潜能组的表达水平显著高于低转移潜能组（p=0.0294）。免疫组化结果显示,ECT2蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达具有明显的差异,其在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织（p=0.0013）。ECT2蛋白主要表达于肝癌组织的胞质中,胞核中也有一定表达。结论：ECT2在肝癌细胞株以及肝癌组织中高表达,并且ECT2在肝癌的恶性行为中可能具有重要作用。

论文目录

• 目录
• 英文缩略语注释
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 MicroRNA生物合成相关基因在肝癌中的表达及其意义
• 前言
• 中文摘要
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 ECT2在肝癌中的表达及其意义
• 前言
• 中文摘要
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢