银思维对拟SAD大鼠脑内tau磷酸化及其O-GlcNAc修饰的调节作用及相关研究

论文摘要

目的：基于胰岛素信号转导与散发性老年性痴呆（SAD）的关系及SAD发病的脑能量代谢障碍学说与tau蛋白异常修饰学说,以大鼠侧脑室注射链脲佐菌素（ICV-STZ）建立SAD动物模型,研究具有升发阳气,祛逐阴邪,健脾开郁化痰、平衡机体阴阳功效的中药复方银思维提取物对SAD模型大鼠的行为学、海马神经元超微结构、脑能量代谢及胆碱能系统相关酶的活性、脑组织tau蛋白磷酸化与O-G1cNAc糖基化修饰的影响及调节作用,探讨复方银思维防治SAD的可能作用机制。方法：将SPF级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐对照组、银思维小、中、大剂量组。除假手术组外,其余动物双侧侧脑室重复注射STZ造模,第二次造模后21天开始治疗。治疗组分别以盐酸多奈哌齐、银思维大、中、小不同剂量浓度灌胃,模型组及假手术组给予等体积的双蒸水,各组均每日1次,共灌胃2个月。治疗结束后,以MOrris水迷宫试验法测试大鼠的空间学习记忆能力,以透射电镜观察大鼠海马CA1区微管等超微结构的变化,以生化方法测定大鼠大脑皮层能量代谢与线粒体功能相关酶以及胆碱能系统酶的活性,以免疫组化及蛋白印迹方法检测大鼠脑组织tau蛋白O-G1cNAc糖基化修饰水平及重要位点Thr231、Ser422的磷酸化水平,同时检测O-G1cNAc糖基化修饰过程中OGT、O—G1cNAcase酶表达的变化。结果：1.ICV-STZ拟SAD模型大鼠与假手术组相比,在定向航行试验中的平均逃避潜伏期及总游泳距离显著延长（P<0.01）,空间探索试验中在目标象限的游泳时间明显缩短（P<0.01）。复方银思维能明显缩短SAD模型大鼠在定向航行试验中的平均逃避潜伏期及总游泳距离,组间比较差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,且能延长SAD大鼠空间探索试验中在目标象限的游泳时间（P<0.05,P<0.01）。银思维小、中、大剂量组与多奈哌齐组组间比较无显著性差异（P>0.05）2.SAD模型组大鼠大脑皮层SDH、COX、Na+-K+-ATPase活性明显低于假手术组（P<0.01）,而复方银思维能显著提高SAD大鼠皮层SDH、COX、Na+-K+-ATPase的活性（P<0.05,P<0.01）,多奈哌齐对照组与SAD模型组相比则无显著性差异（P>0.05）3.SAD模型组大鼠大脑皮层ChAT活性明显低于假手术组（P<0.01）,而AchE活性高于假手术组（P<0.01）,复方银思维能够提高大鼠大脑皮层ChAT活性,同时使得AchE活性下降,组间差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,多奈哌齐组与银思维小、中、大剂量组组间比较无显著性差异（P>0.05）4.SAD模型大鼠海马组织以sWGA富集的O-G1cNAc糖基化蛋白质明显低于假手术组（P<0.01）,且用RL2、CTD110.6抗体检测的O-G1cNAc糖基化tau蛋白表达明显低于假手术组（P<0.01）；而复方银思维能明显提高SAD大鼠海马组织以sWGA富集的O-G1cNAc糖基化蛋白质以及用RL2、CTD110.6检测的O-G1cNAc糖基化tau蛋白表达,组间差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。多奈哌齐对照组与SAD模型组相比则无显著性差异（P>0.05）。5.SAD模型大鼠海马组织OGT的表达明显低于假手术组（P<0.01）O-G1cNAcase表达明显高于假手术组（P<0.01）,而复方银思维能显著提高SAD大鼠海马OGT的表达,降低O-G1cNAcase的表达,组间差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。多奈哌齐对照组与SAD模型组相比无显著性差异（P>0.05）6.SAD模型大鼠海马组织tau蛋白在重要位点Thr231和Ser422的磷酸化P-Thr231、P-Ser422表达高于假手术组（P<0.01）,而复方银思维能减少SAD模型大鼠海马组织P-Thr231、P-Ser422的表达（P<0.05,P<0.01）。多奈哌齐对照组与SAD模型组相比则无显著性差异（P>0.05）结论：1. ICV-STZ模型大鼠存在脑皮层能量代谢与线粒体功能障碍,存在胆碱能系统紊乱,有明显的学习记忆障碍,有脑组织tau蛋白重要位点的异常磷酸化,且模型重复性好,稳定可靠,可以作为SAD模型。2.复方银思维能明显改善SAD大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能是：能够保护微管结构和功能,改善皮层神经元线粒体功能及能量代谢,改善皮层胆碱能系统功能,调节海马组织tau蛋白O-G1cNAc糖基化修饰与tau磷酸化之间的平衡,抑制tau蛋白重要位点的过度磷酸化及其tau毒性,防止SAD的病理进展。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词表
• 引言
• 第一部分 文献回顾与理论研究
• 1 AD的中医研究
• 1.1 病名源流
• 1.2 病因病机认识
• 1.3 治疗方药分析
• 1.4 现代观点与研究现状
• 1.5 问题与对策
• 参考文献
• 2 AD的现代研究
• 2.1 危险因素的多样性与综合性
• 2.2 发病机制的复杂性与综合性
• 2.3 神经病理特征研究
• 2.4 药物治疗现状及针对tau治疗的展望
• 2.5 关于模型复制
• 2.6 困惑与出路
• 3 银思维复方的来源、组方依据及本课题设想
• 参考文献
• 第二部分 实验研究
• 实验一 银思维对拟SAD模型大鼠空间学习记忆能力、海马神经元超微结构的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 实验二 银思维对拟SAD模型大鼠脑皮层能量代谢与线粒体功能相关酶及胆碱能系统的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 实验三 银思维对拟SAD模型大鼠海马tau蛋白0-GlcNAc糖基化修饰及其主要酶类的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 实验四 银思维对拟SAD模型大鼠海马tau蛋白磷酸化水平的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 创新点与展望
• 综述一
• 参考文献
• 综述二
• 参考文献
• 致谢
• 个人工作简历