论文题目: 淫羊藿苷诱导小鼠胚胎干细胞定向分化为心肌细胞作用及其调控研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 药理学
作者: 朱丹雁
导师: 楼宜嘉
关键词: 细胞,心肌细胞,心肌发育依赖性基因,肌小节蛋白,细胞周期,凋亡
文献来源: 浙江大学
发表年度: 2005
论文摘要: 胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES cells)是从早期胚胎内细胞团或桑椹胚分离后,能在体外长期传代培养并保持高度未分化的全能细胞系。1985年Doetschman等人发现在一定条件下,ES细胞可自发分化形成能自主跳动的心肌细胞,据此建立了体外心肌发生模型。这不仅促进了对体外心脏形成、早期心脏发育相关基因分化关键性环节、先天性心脏病发病机制和干细胞移植治疗的研究,而且也为评价化学物潜在胚胎毒性和致畸性提供了体外研究技术。但有关药物尤其是中药活性单体成分诱导ES细胞体外定向分化为心肌细胞效应却知之甚少。ES细胞及其体外定向分化体系能够基本模拟乃至重现体内心肌复杂的发育及组织器官生成过程,富含大量心肌发育依赖性生物信息。当药物诱导ES细胞定向分化时,可特殊地干预细胞内基因状况、转录调控、蛋白表达、信号转导等方面,高度模拟药物在整体动物的作用,重现药物与生物大分子作用时生命现象变化本质。采用高度未分化全能的ES细胞,并利用其在特定微环境下(如含药物等的条件培养液中)可定向分化为心肌细胞的特点,可探索某些心脏疾病发生起源的可能相关环节以及药物作用靶点。同时也为探索构建药效初步评价模型系统,有利于心脏疾病治疗药物发现及机制研究提供依据。将药物配合干细胞植入治疗心功能不全,可能促进移植的干细胞生存及定向分化为心肌细胞,这将成为心血管疾病细胞组织工程治疗的有效途径之一。 淫羊藿(Herba Epimedii)系小檗科(Berberidacae)淫羊藿属(Epimedium)植物,淫羊藿苷(icariin,ICA)是所含的一种黄酮苷类化合物,作为该药材主要有效成分之一,其主要药理活性在于改善心脑血管系统功能、增强机体免疫力及调节内分泌,同时还具有抗肿瘤、抗病毒等作用。已有文献报道,ICA为
论文目录:
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英文摘要
前言
第一部分 ICA及活性代谢产物诱导ES细胞体外定向分化为心肌细胞的药效学研究
一、仪器与试药
二、实验方法
(一) ES细胞支持培养
(二) ES细胞体外定向分化为心肌细胞培养
(三) MTT法测定ICA，ICT和DICT体外抑制ES细胞增殖实验
(四) ICA、ICT和DICT诱导ES细胞体外定向分化为心肌细胞的培养
三、实验结果
(一) MEF细胞、ES细胞及不同分化阶段的细胞形态观察
(二) ICA、ICT和DICT对ES细胞体外增殖影响
(三) ICA、ICT和DICT诱导ES细胞体外定向分化为心肌细胞的量效关系和时效关系研究
四、讨论
五、小结
第二部分 ICA诱导ES细胞体外定向分化为心肌细胞的生物信息研究
一、仪器与试药
二、实验方法
(一) RT-PCR法检测心肌发育依赖性基因表达
(二) 免疫荧光实验检测心肌特异性蛋白表达
(三) 心肌细胞的变时性效应检测
三、实验结果
(一) ICA诱导ES细胞分化为心肌细胞过程中心肌发育依赖性基因表达
(二) ICA诱导ES细胞分化为心肌细胞过程中心肌特异性蛋白表达
(三) ICA诱导ES细胞分化成的心肌细胞变时性效应检测
四、讨论
五、小结
第三部分 ICA诱导ES细胞定向分化早期调节机制研究
一、仪器与试药
二、实验方法
(一) 丫啶橙／溴化乙啶双染色法检测ICA诱导ES细胞凋亡形态学变化
(二) 流式细胞术检测ICA对ES细胞细胞周期及凋亡的影响
(三) RT-PCR方法检测p53基因表达
(四) Western blot法检测p53蛋白和mdm2蛋白表达
(五) Griess法测定ICA对ES细胞内源性释放NO含量影响
(六) 放射性免疫法测定ICA对ES细胞内cAMP和cGMP含量变化
(七) ICA作用ES细胞后培养液中GSNO浓度变化
(八) 一氧化氮合酶抑制剂对ICA诱导ES细胞体外定向分化为心肌细胞影响
三、实验结果
(一) ICA诱导ES细胞凋亡形态学变化
(二) ICA对ES细胞细胞周期及凋亡影响
(三) ICA促ES细胞分化时p53基因表达变化
(四) ICA促ES细胞分化时p53和mdm2蛋白表达变化
(五) ICA诱导ES细胞分化早期内源性NO含量变化
(六) ICA诱导ES细胞分化早期对细胞内cAMP和cGMP含量影响
(七) ICA诱导ES细胞分化早期培养液中GSNO浓度变化
(八) ICA对ES细胞分化为心肌细胞过程中内源性NO含量影响及一氧化氮合酶抑制剂对ICA诱导ES细胞体外定向分化为心肌细胞影响
四、讨论
五、小结
本研究创新点
参考文献
综述 胚胎干细胞体外定向分化成心肌细胞的研究进展
致谢
作者简介
与本研究内容相关的文章发表和专利情况参考文献
附录
发布时间: 2006-06-02
参考文献
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